2015年5月Nature文章“BLAME IT ON THE ANTIBODIES”為整個科研屆敲響了一次警鐘?？贵w選擇不當會使實驗室遭遇“重復性危機”，甚至是“毀滅性”結果！

面對市場上超過300家的抗體公司，200多萬種的抗體。抗體質(zhì)量參差不齊，服務水平差距明顯，科研者們該如何選擇？

HPA金標抗體除了具有高特異性/低交叉反應的優(yōu)點，每種抗體均有超過700多張IHC、IF和WB圖片驗證數(shù)據(jù)，可謂理想的實驗選擇。

   
什么是HPA金標抗體？

The Human Protein Atlas是一個公共門戶，隸屬于人類蛋白質(zhì)組學研究項目。該項目的目標是生產(chǎn)覆蓋全基因組所有基因的抗體，系統(tǒng)性地探索人類蛋白質(zhì)組奧秘。該項目的完成取決于高通量金標抗體生產(chǎn)技術與高質(zhì)量的蛋白表達譜(多種人類組織和細胞獲得)的結合。目前HPA已公布1.8萬多種抗體，每種抗體均有超過700多張IHC、IF和WB圖片驗證數(shù)據(jù)，被稱為：HPA金標抗體。

    
為什么稱之為HPA金標抗體？

HPA金標抗體（Prestige Antibodies）是具有高度特異性的抗體，其抗體應用經(jīng)過全面驗證，所有特異性驗證數(shù)據(jù)都可以在Human Protein Atlas (HPA) Portal (proteinatlas.org)獲得。金標抗體的高度特異性/低交叉反應主要基于以下幾個方面的質(zhì)量控制：1. 抗原序列(位置)選擇；2. 多克隆抗體親和層析純化；3. 多種實驗方法驗證；4. 金標抗體嚴格審批流程。

   
1.抗原選擇

HPA金標抗體的免疫抗原是重組人蛋白表位識別標簽(PrESTs)，表位識別標簽一般含有50-150個氨基酸。表位識別標簽經(jīng)過設計和篩選，使得它們含有*的表位，并且適合激發(fā)高特異性的抗體。通過對人全基因組掃描的方式，確保用于生產(chǎn)抗體的蛋白表位識別標簽與其它蛋白有zui低的同源性。同時，抗原表位還會排除信號肽和蛋白跨膜區(qū)。

   
2.親和層析純化

HPA金標抗體通過親和層析方式進行純化(以PrESTs抗原作為配基)，采用三步法免疫層析的純化工藝：HisABP特異性標簽去除，PrESTs特異性捕獲，zui后通過排阻色譜進行緩沖液的交換，不僅保證了抗體的純度，同時有利于抗體長期保存。

   
3.多種實驗方法驗證

    
·  蛋白芯片

金標抗體的特異性和純度首先經(jīng)過蛋白芯片來驗證。一系列重組人蛋白表位識別標簽(PrESTs)標記在微矩陣芯片上，通過熒光信號確定抗體的特異性。

     
·  免疫組化 (IHC)

免疫組化驗證主要是對目標蛋白的檢測以及其在組織、細胞和亞細胞水平的定位實驗。金標抗體需要在46個正常人類組織(每個實驗重復3次)、432個人腫瘤組織樣本中(20種常見腫瘤組織，每種腫瘤組織來源于不同病人，zui多的一種腫瘤樣本來源于12個不同的病人)做蛋白表達分析。此外，還有56種細胞系的免疫染色實驗數(shù)據(jù)。

     
·  Western Blot (WB)

金標抗體還需通過對肝臟和扁桃體組織提取物、去除IgG和白蛋白的混合血漿以及兩種人類細胞系中的蛋白表達進行WB驗證。此外，金標抗體還要在過表達的體系中做WB驗證。

    
·  免疫熒光 (IF)

金標抗體需要通過的人類三個細胞系中(U-2 OS, A-431和U-251 MG)做亞細胞定位的免疫熒光驗證，以獲得更詳細的亞細胞定位信息。同時，也會有轉錄水平的驗證，以確保金標抗體實驗結果的準確性。

    
注釋：

正常組織、腫瘤組織和細胞的免疫組化圖片都會經(jīng)過病理學家的檢驗和注釋。同時，針對不同的目的蛋白，金標抗體驗證的免疫組化、WB和免疫熒光的實驗數(shù)據(jù)也會和發(fā)表文獻以及生物信息學的數(shù)據(jù)作比較，以確保驗證數(shù)據(jù)的準確性。

       
4.嚴格的審批流程

金標抗體認證通過必須是綜合考慮免疫組化、WB和免疫熒光的實驗驗證結果以及生物信息學和參考文獻。HPA項目有時候針對同一個蛋白也會生產(chǎn)一對抗體，彼此之間抗原表位不同，兩個抗體之間相互驗證。大多數(shù)情況下，這兩個抗體的IHC驗證數(shù)據(jù)是一致的，如果IHC結果有差異，可能存在蛋白異構體的現(xiàn)象，例如不同的拼接體或者翻譯后修飾。超過一半的金標抗體通過嚴謹?shù)膶嶒烌炞C、實驗數(shù)據(jù)與文獻或者生物信息學預測的結果是一致的，這部分金標抗體就會通過認證，在HPA公布。

    
HPA金標抗體能為你的實驗帶來什么？
高特異性的實驗結果：金標抗體均通過嚴格抗原序列比對篩選
豐富的實驗驗證圖片：每一支金標抗體都經(jīng)過蛋白芯片、免疫組化、WB和免疫熒光的實驗驗證。
嚴謹?shù)膮⒖嘉墨I和生物信息學預測：每一支金標抗體除了實驗驗證，發(fā)表文獻和生物信息學預測也是抗體的重要參數(shù)。

HPA金標抗體應用舉例

下圖為抑癌基因ARID1A (抗體貨號：HPA005456)在不同組織和細胞系中的表達和分布。

   
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