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唾液酸分析指南，Ludger可提供唾液酸分析服務(wù)
點擊次數(shù)：3531 發(fā)布時間：2015-1-30
唾液酸分析指南如下，Ludger公司可以提供唾液酸分析的技術(shù)服務(wù)
NeuAc（唾液酸）和NeuGc（神經(jīng)氨酸）的定量分析是監(jiān)管機構(gòu)在生物制藥表征的產(chǎn)品標準規(guī)格指南中提出的一個要求。特別是,人類和非人類的唾液酸 (NeuAc / NANA和NeuGc / NGNA分別)相對水平測定是非常重要的,因為有些病人有高水平的抗神經(jīng)氨酸（anti-NeuGc）抗體，這可導(dǎo)致中和反應(yīng)和快速清除含有神經(jīng)氨酸（NeuGc）的生物藥品 (Nguyen等,2005)。
由于唾液酸（NeuAc）和神經(jīng)氨酸（NeuGc）在分析糖蛋白中具有重要意義，它通常被認為是生物治療藥物的關(guān)鍵質(zhì)量屬性(CQA)。
較廣泛的唾液酸（NeuAc）和神經(jīng)氨酸（NeuGc）比例確定方法是如下：
1. 通過輕度酸水解放糖蛋白上的唾液酸殘基。
2. 用1-1,2 - 二氨基-4,5 - 亞甲基苯酚（DMB）熒光標記釋放的唾液酸。
3. 通過液相色譜法（HPLC）或超液相色譜法（UHPLC）對DMB標記的唾液酸進行相對定量分析。
Ludger的DMB標記試劑盒（貨號：LT-KDMB-A1），提供從糖蛋白釋放唾液酸并用DMB標記的所有功能。該試劑盒包含可以檢測高達22個糖蛋白樣品（每樣品含50-100 μg糖蛋白）的試劑和材料。每個標記可標記每個樣品中大約10 pmol到2.5 nmol的唾液酸。
試劑盒中包含一系列唾液酸的參考標準品（含Neuc，Neu5Gc，Neu5，7Ac2，Neu5，Gc9Ac，Neu5，9Ac2，Neu 5,7,（8），9Ac3Gc），以及NeuAc和NeuGc的定量標準品。這三個標準品可以隨著釋放的唾液酸樣品進行DMB標記。
系列稀釋液制備后的NeuAc和NeuGc定量標準品可用于定量分析。LudgerTag?DMB試劑盒中有提供關(guān)于如何制備的說明. 如有需要NeuAc和NeuGc定量標準品也可在另行購買，請跟我們。
作為陽性對照，我們建議使用包含NeuAc和NeuGc唾液酸的胎球糖蛋白，我們同樣建議使用zui純化的LudgerBioQuantTM糖肽標準品來作為陽性對照。這個糖肽標準品（貨號: BQ-GPEP-A2G2S2-10U）是一個復(fù)雜的N-連接雙觸角聚糖，終止于兩個N-乙酰神經(jīng)氨酸。
使用此標準品可以檢查聚糖釋放、標記和回收的有效性，并可增強您的唾液酸測量準確性。Ludger還銷售可用于識別Neu5，9Ac2的標準品。水可以作陰性對照。
圖1：由LS-UR2 UHPLC色譜柱（貨號LS-UR2-2.1x100）分析出來的DMB-標記唾液酸對照品。
為了檢測聚糖的分離該對照品也可以作為跑樣之前的系統(tǒng)適用性標準品。
唾液酸分析相關(guān)產(chǎn)品
商品型號 | 英文品名 | 中文品名 | 包裝 |
LT-KDMB-A1 | DMB Sialic Acid Labeling Kit | DMB 唾液酸釋放標記試劑盒 | 1Reaction Set |
LS-R1-4.6x150 | Ludger Sep R1 HPLC Column | R1 HPLC 色譜柱-唾液酸 | 4.6 x150 mm |
LS-UR2-2.1x100 | Ludger Sep UR2 UHPLC Column–sialic acids | UR2 UHPLC 色譜柱-唾液酸 | 2.1 x 100 mm |
CM-NEU-AC-01 | N-acetylneuraminic acid quantitative standard | N-乙酰神經(jīng)氨酸定量標準品 | 1 nmol |
CM-NEU-GC-01 | N-glycolyneuraminic acid quantitative standard | N-羥乙酰神經(jīng)氨酸定量標準品 | 1 nmol |
CM-NEU5,9,AC-01 | N-acetylneuraminic acid qualitative standard | N-乙酰神經(jīng)氨酸定性標準品 | 1 nmol |
BQ-GPEP-A2G2S2 | A2G2S2 glycopeptide standard | A2G2S2 糖肽標準品（用于唾液酸釋放和標記過程） | 10 μg |
GCP-FET-50U-X4 | Fetuin Glycoprotein (4 x 50 ug) | 胎球糖蛋白（4×50微克）（唾液酸化陽性對照） | 4 x 50 μg |