6-磷酸葡萄糖脫氫酶（G6PDH）試劑盒說(shuō)明書

6-磷酸葡萄糖脫氫酶（G6PDH）試劑盒說(shuō)明書

分光光度法 50 管/48 樣

正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義：

G6PDH（EC 1.1.1.49）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是磷酸戊糖途徑的關(guān)鍵酶，催化 6-磷酸葡萄糖氧化為 6 -磷酸葡萄糖酸內(nèi)酯，同時(shí)將NADP⁺還原為NADPH，供

生物合成及維持細(xì)胞內(nèi)的還原狀態(tài)用。因此 6-磷酸葡萄糖脫氫酶活性的高低可以從一定程

度上反映出生物體的生物合成和抗氧化能力。

測(cè)定原理：

G6PDH 催化NADP⁺還原生成NADPH，在340 nm 下測(cè)定NADPH 增加速率。

需自備的儀器和用品：

紫外分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL 石英比色皿、研缽、冰和蒸

餾水。

試劑的組成和配制：

提取液：60mL×1 瓶，4℃保存；

試劑一：液體47.5 mL×1 瓶，4℃保存；

試劑二：粉劑×1 支，-20℃保存；

試劑三：粉劑×1 支，-20℃保存；

樣本的前處理：

1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量

（10⁴ 個(gè)）：提取液體積（mL）為1000~5000：1 的比例（建議2000 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL

提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30

次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10 的比例（建議稱取約0.1g 組織，

加入1mL 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

2、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。

測(cè)定步驟：

1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm，蒸餾水調(diào)零。

2、將試劑二和試劑三轉(zhuǎn)移至試劑一中充分溶解；在37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）

水浴10min 以上；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。

3、在1mL 石英比色皿中加入50μL 樣本和950μL 試劑一，混勻后立即記錄340nm 處1min

后吸光值A1 和 6min 后的吸光值A2，計(jì)算ΔA=A2-A1。

注意：若ΔA 大于0.5，需將酶液用提取液稀釋，計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)?；?qū)⒎磻?yīng)

時(shí)間縮短至2min，使A2-A1 小于0.5，可提高檢測(cè)靈敏度。