土壤酸性磷酸酶測(cè)試盒

土壤酸性磷酸酶測(cè)試盒產(chǎn)品簡介：

    土壤磷酸酶是一類催化土壤有機(jī)磷礦化的酶，其活性的高低直接影響著土壤中有機(jī)磷的分解轉(zhuǎn)化及其生物有效性，是評(píng)價(jià)土壤磷素生物轉(zhuǎn)化方向與強(qiáng)度的指標(biāo)。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH顯著影響，根據(jù)適pH范圍，通常分為酸性、中性和堿性三種類型。酸性環(huán)境中，S-ACP催化磷酸苯二鈉水解生成苯酚和磷酸氫二鈉，通過測(cè)定酚的生成量即可計(jì)算出S-ACP活性。

產(chǎn)品內(nèi)容：

試劑一：液體×1瓶，4℃避光保存。

試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存。用前加50mL蒸餾水充分溶解。

試劑三：液體×1瓶，4℃保存。

試劑四：粉劑×1瓶，4℃避光保存。臨用前加1152μL無水乙醇（自備），48μL蒸餾水充分溶解。（變褐色后不能再使用）

標(biāo)準(zhǔn)品：液體×1瓶，0.5μmol/mL苯酚標(biāo)準(zhǔn)液，4℃保存。

土壤酸性磷酸酶測(cè)試盒操作步驟：

一、粗酶液提?。?nbsp;  

稱取風(fēng)干混勻土壤約0.1g，加入0.05mL甲苯（自備），輕搖15min；加0.4 mL試劑一并且搖勻后，置于37℃恒溫培養(yǎng)箱，開始計(jì)時(shí)，催化反應(yīng)24h；到時(shí)后迅速加入1mL試劑二充分混勻，以終止酶催化的反應(yīng)。8000rpm，25℃離心10min，取上清液置于冰上待測(cè)。

二、測(cè)定步驟：

1.分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長到660nm，蒸餾水調(diào)零。

2.空白管：取1mL玻璃比色皿，加入50μL蒸餾水，100μL試劑三，20μL試劑四，充分混勻，顯色后再加蒸餾水830μL，混勻后室溫靜置30 min，于660nm測(cè)定吸光度，記為A空白管。

3.標(biāo)準(zhǔn)管：取1mL玻璃比色皿，加入50μL標(biāo)準(zhǔn)液，100μL試劑三，20μL試劑四，充分混勻，顯色后再加蒸餾水830μL，混勻后室溫靜置30 min，于660 nm測(cè)定吸光度，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。

4.測(cè)定管：取1mL玻璃比色皿，加入50μL上清液，100 μL試劑三，20μL試劑四，充分混勻，顯色后再加蒸餾水830μL，混勻后室溫靜置30 min，于660nm測(cè)定吸光度，記為A測(cè)定管。

注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。

土壤酸性磷酸酶測(cè)試盒S-ACP活性計(jì)算： 

活性單位定義：37℃中每克土壤每天釋放1nmol酚為1個(gè)酶活單位。

S-ACP（nmol/d/g）=[C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測(cè)定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)]×V總÷W÷T 

=725×(A測(cè)定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)÷W

C標(biāo)準(zhǔn)液：0.5μmol/mL；V總：催化體系總體積，1.45mL；W：土壤樣品質(zhì)量，g；T：催化反應(yīng)時(shí)間，24 h=1d。