植物α-淀粉酶（α-amylase，α-AL）試劑盒說明書

        植物α-淀粉酶（α-amylase，α-AL）試劑盒說明書

可見分光光度法   規(guī)格：50管/24樣

產(chǎn)品內(nèi)容：

試劑一：25mL×1 瓶，常溫保存，若有黃色晶體析出，需加熱溶解后再用；

試劑二：20mL×1 瓶，4℃保存。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

淀粉酶負(fù)責(zé)水解淀粉，包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)可隨機(jī)地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷鍵，生成葡萄糖、麥芽糖、麥芽三糖、糊精等還原糖，同時(shí)使淀粉的粘度降低，因此又稱為液化酶。

還原糖還原3,5-二硝基水楊酸生成棕紅色物質(zhì)。β-淀粉酶不耐熱，在70℃鈍化15min，從而測(cè)定α-淀粉酶活性。

試驗(yàn)中所需的儀器和試劑：

可見分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、玻璃比色皿、研缽和蒸餾水。

操作步驟：

一、粗酶液提取：

稱取0.1~0.2g 樣本（建議稱取約0.1g 樣本），加1 mL 蒸餾水勻漿；將勻漿倒入離心管中，在室溫下放置提取15min，每隔5min 振蕩1 次，使其充分提取；3000g，25℃離心10min，吸取上清液并且加蒸餾水定容至10 mL，搖勻，即為淀粉酶原液。

• 操作步驟和加樣表（在1.5mLEP 管中依次加入下列試劑）：

分光光度計(jì)預(yù)熱30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到540 nm，蒸餾水調(diào)零。

1、β-淀粉酶滅活：

70℃水浴15min 左右，冷卻

2、加入試劑一并且保溫：

將以上對(duì)照管、測(cè)定管和試劑二置于40℃恒溫水浴中保溫10min左右。

3、準(zhǔn)確反應(yīng)5min

在40℃恒溫水浴中準(zhǔn)確保溫5min

4、加入試劑一，并且混勻

混勻，95℃水浴5min，冷卻，540nm 處讀取對(duì)照管和測(cè)定管吸光度，計(jì)算ΔA=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管。

三、α-淀粉酶活性計(jì)算：

1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定回歸曲線為y=3.7215x -0.1778； x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y 為吸光值。

2、α-淀粉酶活性

（1）按照樣本質(zhì)量計(jì)算

單位定義：每g 組織每分鐘催化產(chǎn)生1mg 還原糖定義為1 個(gè)酶活力單位。

α- 淀粉酶活性(mg/min/g 鮮重)=[(ΔA＋0.1778)÷3.7215×V 反總]÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T

=1.075×(ΔA＋0.1778)÷W

（2）按照蛋白質(zhì)含量計(jì)算

單位定義：每mg 組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1mg 還原糖定義為1 個(gè)酶活性單位。

α-淀粉酶活性(mg/min/mg prot)= [(ΔA＋0.1778)÷3.7215×V 反總]÷（V 樣×Cpr）÷T

=0.1075×(ΔA＋0.022) ÷Cpr

V 反總：反應(yīng)體系總體積，0.5mL；V 樣：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.25 mL；V 樣總：提取液總體積，10 mL； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，5min。