通用基因組 DNA 提取試劑盒使用說(shuō)明書

通用基因組 DNA 提取試劑盒使用說(shuō)明書

規(guī)格：50T/ 100T

保存：室溫(15℃-25℃) 干燥保存，復(fù)檢期 12 個(gè)月，2℃-8℃保存時(shí)間更長(zhǎng)。開(kāi)封后請(qǐng)將 RNase A，蛋白酶 K于-20℃保存。

        試劑盒內(nèi)容：     50T         100T

         RNase A             1ml             1ml×2

                蛋白酶 K             1ml            1ml×2

                溶液 A                25ml            50ml

                溶液 B                25ml            50ml

          漂洗液          15ml      15ml×2

          洗脫液                 15ml              30ml

          吸附柱           50個(gè)       100個(gè)

          收集管           50個(gè)       100個(gè)

           說(shuō)明書           1份        1份

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

    本試劑盒為通用型，適合于從土壤，糞便，昆蟲(chóng)，以及其他樣本中提取基因組 DNA。對(duì)細(xì)菌，真菌，昆蟲(chóng)等樣本都具有很好的裂解效果，大限度的保留了生物 DNA 的多態(tài)性。

     使用本試劑盒提取的 DNA 產(chǎn)量大、完整性好，可直接用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR 、文庫(kù)構(gòu)建、Southern 雜交等實(shí)驗(yàn)。

操作步驟：

     使用前請(qǐng)先在漂洗液中加入無(wú)水乙醇，加入體積請(qǐng)參照瓶上的標(biāo)簽。所有離心步驟均為使用臺(tái)式離心機(jī)

在室溫下離心。

1、樣品的處理：

1）土壤：稱取 0.1-0.3g (根據(jù)干濕)土壤，放入研缽中，倒入適量的液氮，立即研磨，重復(fù) 3 次，使土壤顆粒研成粉末，加 500ul 溶液 A，振蕩至*懸浮。

2）糞便：稱取 0.1-0.3g (根據(jù)干濕) 糞便，加 500ul 溶液 A，振蕩至*懸浮。

3）昆蟲(chóng)：稱取 0.1-0.3g 昆蟲(chóng)，倒入適量的液氮，立即研磨，重復(fù) 3 次，使昆蟲(chóng)研成粉末，加 500ul 溶液A，振蕩至*懸浮。

4）未知樣品，如為細(xì)未狀，可直接稱取 0.1-0.3g(根據(jù)干濕)加 500ul 溶液 A，如為塊狀，可 0.1-0.3g 用液氮研磨成粉未，再加 500ul 溶液 A，振蕩至*懸浮。

2、向懸浮液中加入 20ul 的 RNase A（10mg/ml），55℃放置 10min。

3、加入 20ul 的蛋白酶 K（10mg/ml），充分混勻，55℃水浴消化，30min。消化期間可顛倒離心管混勻數(shù)次，12000 轉(zhuǎn)離心 10min。將上清轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的離心管中。如有沉淀，可再次離心。

4、加入 500ul 溶液 B，充分混勻。如出現(xiàn)白色沉淀，于 55℃放置 5min，沉淀即會(huì)消失，不影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如溶液未變清亮，說(shuō)明樣品消化不*，可能導(dǎo)致提取的 DNA 量少及不純，還有可能導(dǎo)致上柱后堵柱子，請(qǐng)?jiān)?/span>加消化時(shí)間。

5、加入 500ul 無(wú)水乙醇，充分混勻，此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀，不影響 DNA 的提取，可將溶液和絮狀沉淀都加入吸附柱中，放置 2min (分兩次加入，每次 700ul)。

6、12000rpm 離心 2min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

7、向吸附柱中加入 600ul 漂洗液(使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇)，12000rpm 離心 1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

8、向吸附柱中加入 600ul 漂洗液，12000rpm 離心 1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中

9、12000rpm 離心 2min，將吸附柱置于室溫或 50℃溫箱放置數(shù)分鐘，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，否則漂洗液中的乙醇會(huì)影響后續(xù)的實(shí)驗(yàn)如酶切、PCR 等。

10、將吸附柱放入一個(gè)干凈的離心管中，向吸附膜中央懸空滴加 50-200ul 經(jīng) 65℃水浴預(yù)熱的洗脫液，室溫放置 5min，12000rpm 離心 2min。

11、離心所得洗脫液再加入吸附柱中，室溫放置 2min，12000rpm 離心 2min，即可得到高質(zhì)量的基因組 DNA。

注意事項(xiàng)：

1、由于樣品不同，終提取的 DNA 含量和純度也有所不同，一般來(lái)說(shuō)，如果所提取 DNA 用電泳的方法檢測(cè)不到，PCR 會(huì)有結(jié)果，樣品盡可能的新鮮。否則會(huì)導(dǎo)致提取的 DNA 片段較小且提取量也下降。

2、若試劑盒中的溶液出現(xiàn)沉淀，可在 65℃水浴中重新溶解后再使用，不影響提取效果。

3、如果樣品消化不*，后面的離心步驟中可能會(huì)出現(xiàn)堵柱子的情況，可適當(dāng)延長(zhǎng)離心時(shí)間。

4、洗脫緩沖液的體積不少于 50ul，體積過(guò)小會(huì)影響回收效率；洗脫液的 pH 值對(duì)洗脫效率也有影響，若需要用水做洗脫液應(yīng)保證其 pH 值在 8.0 左右(可用 NaOH 將水的 pH 值調(diào)至此范圍)，pH 值低于 7.0 會(huì)降低洗脫效率；DNA 產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃，以防 DNA 降解。

5、DNA 濃度及純度檢測(cè)（濃度較高時(shí)）：得到的基因組 DNA 片段的大小與樣品保存時(shí)間、操作過(guò)程中的剪切力等因素有關(guān)?；厥盏玫降?/span> DNA 片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測(cè)濃度與純度。DNA 應(yīng)在 OD260 處有顯著吸收峰， OD260 值為 1 相當(dāng)于大約 50μg/ml 雙鏈 DNA、40μg/ml 單鏈 DNA。OD260/OD280 比值應(yīng)為 1.7-1.9，如果洗脫時(shí)不使用洗脫緩沖液，而使用去離子水，比值會(huì)偏低，因?yàn)?/span> pH 值和離子存在會(huì)影響光吸收值，但并不表示純度低。