AO 染色液(1mg/ml)說明書

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

Acridine Orange 屬于三環(huán)雜芳香燃料，可以標(biāo)記 DNA、RNA，屬于異染性熒光染料。該染料具有膜通透性，能透過細(xì)胞膜，使核 DNA 和 RNA 染色。因此 AO 常用于細(xì)胞內(nèi) DNA 和 RNA 進(jìn)行檢測(cè)。AO 與核酸結(jié)合方式主要有：1、插入性結(jié)合，AO 嵌入核酸雙鏈的堿基對(duì)之間，這種結(jié)合方式主要為 AO 與 DNA 的結(jié)合，其熒光發(fā)射峰為 530nm，激發(fā)后呈綠色熒光；2、靜電吸引，帶正電荷的 AO 與單鏈核酸的磷酸根(帶負(fù)電荷)產(chǎn)生靜電間的吸引結(jié)合，這種結(jié)合方式主要為 AO 與 RNA 的結(jié)合，其熒光發(fā)射峰為 640nm，激發(fā)后呈紅色熒光，少量結(jié)合會(huì)呈桔黃色或桔紅色熒光。因此，吖啶橙嵌合到雙鏈 DNA 中顯綠色，與單鏈 DNA 或 RNA 結(jié)合時(shí)發(fā)桔黃色或橙紅色熒光。

     AO 染色液(1mg/ml)為儲(chǔ)存液，使用時(shí)應(yīng)稀釋到合適濃度后使用。染色后在熒光顯微鏡下觀察，AO 可透過正常細(xì)胞膜，使細(xì)胞核呈綠色或黃綠色均勻熒光；而在凋亡細(xì)胞中，因染色質(zhì)固縮或斷裂為大小不等的片斷，形成凋亡小體。AO 使其染上致密濃染的黃綠色熒光或黃綠色碎片顆粒；而壞死細(xì)胞黃熒光減弱甚至消失。AO 染色常與 EB 染色合用雙染，因 EB 只染死細(xì)胞使之產(chǎn)生桔黃色熒光，由此可區(qū)分出正常細(xì)胞、凋亡細(xì)胞及壞死細(xì)胞。

自備材料：

1、熒光顯微鏡

2、低速離心機(jī)

3、PBS

4、細(xì)胞計(jì)數(shù)板

5、載玻片、蓋玻片

操作步驟(僅供參考)：

1、收集細(xì)胞(采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)，應(yīng)先固定細(xì)胞)，用 PBS 清洗細(xì)胞 1 次，計(jì)數(shù)并調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度至 10⁶/ml。

2、取適量的細(xì)胞懸液，加入 Acridine Orange Stain(1mg/ml)，使 AO 終濃度為 8.5～17 μg/ml，輕輕混勻。

3、室溫避光染色 15～20min，滴加于載玻片上并加蓋玻片或上流式細(xì)胞儀分析。

4、熒光顯微鏡下觀察(激發(fā)波長(zhǎng) 488nm)，計(jì)數(shù)并拍照。

染色結(jié)果：

注意事項(xiàng)：

1、Acridine Orange Stain(1mg/ml)不含破膜劑，較少單獨(dú)使用。

2、吖啶橙染色常與 EB 染色合用，可區(qū)分出正常細(xì)胞、凋亡細(xì)胞及壞死細(xì)胞。

3、如有低溫離心機(jī)進(jìn)行離心效果更佳。

4、操作過程中應(yīng)注意減少試劑暴露于強(qiáng)光下的時(shí)間。

5、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

有效期： 12 個(gè)月有效。常溫運(yùn)輸，4℃保存。