組織單胺氧化酶B 型（MAO－B）活性熒光定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書

主要用途

      組織單胺氧化酶 B 型（MAO－B）活性熒光定量檢測試劑是一種旨在通過單胺氧化酶和過氧化

酶耦聯(lián)反應(yīng)系統(tǒng)中，在A 型單胺氧化酶抑制劑的存在下，底物對羥氧化產(chǎn)物過氧化氫，與非熒光

性染料乙酰二氫氧吩惡嗪反應(yīng)產(chǎn)生高度熒光的羥基異吩惡唑酮后熒光峰值的變化，來測定組織裂解懸液樣

品中酶活性的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級科學(xué)家精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種

動物或人體組織樣品、部分或純化酶樣品中B 型單胺氧化酶（MAO－B）的特異活性檢測，以及抑制

劑和激活劑的篩選。常用于藥理學(xué)、毒理學(xué)等研究。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定。

保存方式

保存GENMED 清理液（Reagent A）在 4℃冰箱里，其余的保存在－20℃冰箱里；GENMED 反應(yīng)液（Reagent

D）和GENMED 標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent F）避免光照，有效保證 6 月

用戶自備

1.5毫升離心管：用于樣品制備和保存的容器

15 毫升錐形離心管：用于樣品制備的容器

恒溫培養(yǎng)箱：用于反應(yīng)液孵育

微型臺式離心機：用于樣品制備

比色皿或酶標(biāo)板：用于熒光分析的容器

熒光分光光度儀或熒光酶標(biāo)儀：用于熒光分析

實驗步驟

實驗開始前，將－20℃冰箱里的試劑盒中的試劑置入冰槽里融化。反應(yīng)液（Reagent D）避免光

照。然后進行下列操作。

一、 樣品準(zhǔn)備

1． 手術(shù)取出動物組織，并秤重以確定500 毫克組織重量

2． （選擇步驟）放進預(yù)冷的15 毫升錐形離心管

3． （選擇步驟）加入xx 毫升清理液（Reagent A）清洗1 次

4． 移入到一個液氮凍存管

5． 即刻放進液氮罐過夜

6． 次日從液氮罐里取出，即刻（最快速度）用研磨棒碾碎組織成粉末狀（注意：切莫使組織凍融）

7． 放進一個15 毫升錐形離心管

8． 加入置于冰槽里的xx 微升 裂解液（Reagent B）

9． 強力渦旋震蕩30 秒，充分混勻

10．放進冰槽里孵育30 分鐘，期間每10 分鐘強力渦旋震蕩30 秒（注意：如需暫時停止，放進－70℃冰箱

里儲存?zhèn)溆茫?/span>

11．即刻放進4℃臺式離心機離心10 分鐘，速度為1000g

12．小心移取上清液到新的無菌的1.5 毫升離心管

13．移取 10 微升進行蛋白定量檢測（注意：建議使用 Bradford 蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒－

GMS30030.1）

14．放進－70℃的冰箱里保存或置于冰槽里備用

二、 測定準(zhǔn)備

1. 準(zhǔn)備好上述待測樣品，置于冰槽里

2. 設(shè)定好熒光分光光度儀或熒光酶標(biāo)儀（溫度為37℃）：激發(fā)波長530nm，散發(fā)波長590nm，并置零

3. 準(zhǔn)備好5 個1.5 毫升離心管，標(biāo)記為1 至5 號管

4. 加入xx 微升 緩沖液（Reagent C）到1 號管

5. 分別加入xx 微升GENMED 緩沖液（Reagent C）到2 至5 號管

6. 移取xx 微升GENMED 標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent F）到1 號管，混勻

五、 計算樣品活性

＝納摩爾/毫克/小時

六、 酶標(biāo)板測定

1． 在 96 孔酶標(biāo)板上做好相應(yīng)標(biāo)記：標(biāo)準(zhǔn)樣品和待測樣品

2． 分別移取 xx 微升 GENMED 緩沖液（Reagent C）到相應(yīng)孔中

3． 分別加 xx 微升待測樣品（50 微克蛋白總量）或上述制備的 GENMED 標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent F）

4． 分別加入 xx 微升 GENMED 反應(yīng)液（Reagent D）

5． 分別加入 xx 微升 GENMED 底物液（Reagent E）

6． 輕輕搖動酶標(biāo)板

7． 在 37℃溫度下孵育 60 分鐘

8． 即刻放進熒光酶標(biāo)儀檢測：獲得相對熒光讀數(shù)

9． 構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線：縱座標(biāo)（Y 軸）為相對熒光單位；橫座標(biāo)（X 軸）為標(biāo)準(zhǔn)羥基異吩噁唑酮濃度（納摩

爾/升）

10．根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品對應(yīng)羥基異吩噁唑酮濃度

11．活性計算：

＝納摩爾/毫克/小時

注意事項

1． 本產(chǎn)品為 20 次操作，包括標(biāo)準(zhǔn)樣品

2． 操作時，須戴手套

3． 建議樣品保存在－70℃冰箱里

4． 系統(tǒng)操作過程中，背景測定只需 1 次

5． 加樣后 3 秒內(nèi)比色測定

6． 測定值由低到高變化；測定可以持續(xù) 60 分鐘

7． 熒光測定后，比色皿須清洗

8． 樣本測定 60 分鐘讀數(shù)高于 0 分鐘讀數(shù)表明具有酶活性

9． 建議待測樣本蛋白濃度為 50 微克/50 微升；如果樣本酶活性過低或過高，則可以增加或降低樣本量（本

公司提供 GENMED Bradford 蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒 GMS30030.1）

10．如果用戶沒有匹配的熒光濾波器，可以使用 530 至 570nm 激發(fā)波長和 590 至 600nm 散發(fā)波長的任一波

長替代

11．如果用戶沒有熒光分光儀，可以使用分光光度儀替代，波長為 570nm

12．如果待測樣品濃度過高或過低，可以調(diào)整樣品濃度

13．單胺氧化酶 B 型單位活性定義為：在 37℃，pH 7.6 條件下，每小時內(nèi)能夠氧化產(chǎn)生 1 微摩爾羥基異吩

惡唑酮所需的酶量作為一個活性單位

14．本公司提供系列單胺氧化酶類檢測試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定

2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測敏感