小鼠腎足細(xì)胞系（株）傳代基本技術(shù)

Mouse podocyte 小鼠腎足細(xì)胞系（株）傳代基本技術(shù)
1.選用細(xì)胞生長狀態(tài)好(80-90%)的細(xì)胞進(jìn)行傳代。
2.吸除細(xì)胞培養(yǎng)液。用含雙抗的1×PBS（pH7.4)清洗細(xì)胞培養(yǎng)
瓶2次。加入1ml 消化液至細(xì)胞培養(yǎng)瓶，輕輕搖動(dòng)，使細(xì)胞消化
液剛剛覆蓋細(xì)胞表面。注：消化液配比為：0.25%胰蛋白酶＋
0.02%EDTA。
3.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶置于5%CO2、95%空氣、37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)數(shù)
分鐘后，在顯微鏡下觀察細(xì)胞的消化狀態(tài)。注意：若貼壁細(xì)胞逐
漸趨于圓形或部分懸浮后，即可用手指輕輕拍打細(xì)胞培養(yǎng)瓶側(cè)部
或底部使大部分貼壁細(xì)胞脫落，之后立即加入細(xì)胞終止液，終止
細(xì)胞消化。每種細(xì)胞的消化時(shí)間有差異，消化時(shí)注意觀察，不要
消化太久。
4.吹打培養(yǎng)瓶中懸浮細(xì)胞若干次，吸出細(xì)胞懸浮液，轉(zhuǎn)入15ml
離心管中，800rpm 離心5分鐘。
5.棄離心管中上清液，加入細(xì)胞培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。細(xì)胞計(jì)數(shù)，確
定細(xì)胞數(shù)量。
6.細(xì)胞分瓶后，加入適量細(xì)胞培養(yǎng)液至細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，置于
5%CO2、95%空氣、37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)24小時(shí)。