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 EHA105 Chemically Competent Cell

產品規(guī)格 

EHA105：                                                                  100μl/支
pCAMBIA2301（control vector，10ng/μl )                    10μl
保存條件(保質期)：                                         -80℃（12個月）

基因型

C58 (rif^R) Ti pEHA105 (pTiBo542DT-DNA) Succinamopine

EHA105 Chemically Competent Cell產品說明
EHA105菌株由EHA101菌株改造而來，為C58型背景，核基因中含有篩選標簽——利福平抗性基因rif，為了便于轉化操作，此菌株攜帶一無自身轉運功能的琥珀堿型Ti質粒pEHA105 (pTiBo542DT-DNA)，此質粒含有vir基因 (vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件，pEHA105 (pTiBo542DT-DNA)質粒自身的T-DNA轉移功能被破壞，但可以幫助轉入的雙元載體T-DNA順利轉移)。EHA105菌株適用于水稻、煙草等植物的轉基因操作。本公司生產的EHA105化學轉化感受態(tài)細胞經特殊工藝制作，pCAMBIA2301質粒檢測轉化效率>10⁴ cfu/μg DNA。

操作方法

1. 取-80℃保存的農桿菌感受態(tài)于室溫或手心片刻待其部分融化，處于冰水混合狀態(tài)時插入 冰中。

2.每100 μl感受態(tài)加入0.01-1 μg質粒DNA（轉化效率較高，次使用前做預實驗確定所加質粒的量），用手打管底混勻，依次于冰上靜置5分鐘、液氮5分鐘、37℃水浴5分鐘、冰浴5分鐘。

3. 加入700 μl無抗生素的LB或YEB液體培養(yǎng)基，于28℃振蕩培養(yǎng)2~3小時。

4. 6000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應抗生素的LB或YEB平板上，倒置放于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3天

（當平板只含有50 μg/ml kan 時，28℃培養(yǎng)48 h即可；平板中同時加入50 μg/ml kan，20 μg/ml rif 時，需28℃培養(yǎng)60 h；如果使用的平板含有50 μg/ml rif 則需要28℃培養(yǎng)72-90 h）。