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DH5α λpir Chemically Competent Cell 

產(chǎn)品規(guī)格

DH5α λpir：                                              100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                   10μl

保存條件(保質(zhì)期)：                            -80℃（6個(gè)月） 

基因型

F- φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) LAMpir U169 endA1 recA1 hsdR17(r_k^-,m_k⁺) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1 phoA

 DH5α λpir Chemically Competent Cell產(chǎn)品說明

DH5α λpir菌株來源于DH5α，在DH5α大腸桿菌基因組中引入LAMpir，即為DH5α λpir，該菌株可以表達(dá) PIR蛋白，使得含有R6Kg ori復(fù)制子的質(zhì)?？梢栽谄渲姓?fù)制。 DH5α λpir菌株缺失核酸內(nèi)切酶 (endA)，提高了質(zhì)粒DNA的產(chǎn)量和質(zhì)量；重組酶缺陷型 (recA)減少插入片段的同源重組概率，保證了插入DNA 的穩(wěn)定性；lacZΔM15的存在使DH5α可用于藍(lán)、白斑篩選；但DH5α λpir菌株生長(zhǎng)速度較慢，在平板培養(yǎng)或液體搖菌時(shí)應(yīng)延長(zhǎng)生長(zhǎng)時(shí)間。開發(fā)的DH5α λpir感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>1×10⁹ cfu/μg DNA。

操作方法

1. DH5α λpir感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物）并用手打EP管底混勻，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇70分鐘。

4. 5000 rpm離心1分鐘收集菌體，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的LB培養(yǎng)基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱至少18小時(shí)。

注意事項(xiàng)

1. 感受態(tài)細(xì)胞在冰中緩慢融化。插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過長(zhǎng)，長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

2. DH5α λpir菌株生長(zhǎng)緩慢，在平板上培養(yǎng)或液體搖菌時(shí)應(yīng)延長(zhǎng)菌體生長(zhǎng)時(shí)間（37℃，18小時(shí)以上）。

3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少終用于涂板的菌量。