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A549 (人肺癌細胞)

規(guī)格： 1*10 ⁶   

細胞介紹

該細胞系由D.J.Griad通過肺癌組織移植培養(yǎng)建系，患者為58歲白人男性。A549能通過胞苷二磷酸膽堿途徑合成含有高含量不飽和脂肪酸的卵磷脂。

細胞特性

1） 來源：肺癌

2） 形態(tài)：上皮細胞樣，多角形；貼壁生長

3） 含量：>1x106

4） 污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1） 準備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

收到細胞拆包：

1. 請立即檢查包裝袋是否有破損或漏液，如有，請拍照并及時與技術聯系。

2.請立即將細胞從包裝盒中取出，并按照下方操作步驟進行處理。

T25 培養(yǎng)瓶中的細胞操作步驟：

1. 75%酒精棉球擦拭 T25 細胞培養(yǎng)瓶外部。

2. 顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照保存（40×,100×,200×各一張）前三天照片為重要售后依據，不提供或未拍照默認收到狀態(tài)良好。

3. 不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞放入37度培養(yǎng)箱中靜置3-4小時后再做處理，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。

貼壁細胞：若細胞密度較小，無菌操作，去掉培養(yǎng)基。每瓶添加配制好的培養(yǎng)基 5-6ml。放到 37 度培養(yǎng)箱培養(yǎng)。待細胞密度到80%以上，進行傳代。

懸浮細胞：將瓶內所有培養(yǎng)基離心收集，重懸計數根據密度進行分瓶，密度在 3x10^5/ml 為宜。 

注意：第一次傳代比例建議 1:2，之后可根據細胞密度和增殖情況適當調整。

凍存管細胞的操作步驟：

1. 收到細胞后，檢查外包裝情況和箱內是否還有干冰。如有外包裝破損干冰已揮發(fā)等問題，請即時聯系。

2. 將細胞取出轉移至-80 度冰箱(不超過一周）或液氮保存,建議盡早復蘇。

3. 復蘇第一管后有活性狀態(tài)問題及時與我們聯系，會有技術人員與您溝通指導后再復蘇第二管。 注意：為保證細胞的高存活率，收到產品后，請立即解凍復蘇細胞。

細胞傳代：

1. 細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時，棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細胞一次；

2. 添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入 5ml 培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心5min；

3. 棄上清，沉淀細胞用 1-2ml 培養(yǎng)基重懸，然后按 1:2 比例進行分瓶傳代，最后放入 37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

細胞復蘇：

1. 從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入 37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結晶，然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2. 將凍存管中的細胞移至含 6ml 培養(yǎng)基的 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3. 棄上清，沉淀用 6ml 培養(yǎng)基重懸，接種 25cm2培養(yǎng)瓶，于 37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

細胞凍存：

1. 細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細胞一次；

2. 添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3. 用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，并放置于凍存管中；

4. 先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉入液氮中進行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。

適用范圍:

本產品僅限于科學研究，絕不可作為人類或者動物疾病的治療產品使用。

僅用于科研，不能用于臨床診斷！所有產品僅供科研使用，不得用于人或動物的治療等任何其他用途，不為任何個人提供產品和服務。以實際收貨產品說明書為準，網站說明書僅供參考。