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豬圓環(huán)病毒通用PCR試劑盒

Porcine Circovirus(PCV)

產(chǎn)品及特點

豬圓環(huán)病毒(Porcine Circovirus，PCV)有 PCV-1 和 PCV-2 兩種型，其 基因組為單鏈 DNA，長度分別為 1759nt 和 1768nt，其同源性低于 80%，但 基因組結(jié)構(gòu)相似。PCV-1 無致病性，廣泛存在于豬體內(nèi)。PCV-2 對豬具有較強 的易感性，感染豬可自鼻液、糞便等廢物中排出病毒，經(jīng)口腔、呼吸道途徑感 染不同年齡的豬。感染病毒后的病豬常見的癥狀是豬只漸進性消瘦或生長遲 緩，這也是診斷所必需的臨床依據(jù)，其他癥狀有厭食、精神沉郁、行動遲緩、 皮膚蒼白、被毛蓬亂、呼吸困難，咳嗽為特征的呼吸障礙，較少發(fā)現(xiàn)的癥狀為 腹瀉和中樞神經(jīng)系統(tǒng)紊亂，一旦感染該病毒，發(fā)病率一般很低而病死率都很高， 對養(yǎng)豬業(yè)帶來較大的經(jīng)濟損失，因此快速檢測豬圓環(huán)病毒具有重要意義。本產(chǎn) 品是根據(jù) PCR 原理開發(fā)檢測豬圓環(huán)病毒通用的試劑盒，它具有下列特點

1. 即開即用，用戶只需要提供 DNA 模板。

2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化，專一性強，只擴增豬圓環(huán)病毒，與其他病毒沒有交叉 反應(yīng)。

3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。

5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

豬圓環(huán)病毒通用PCR試劑盒規(guī)格及成分

運輸及保存 低溫運輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對照需要單獨放置，不要污染其 他試劑。 

自備試劑 樣品 DNA。

使用方法 一、樣品 DNA 的制備

1. 如果有 N 個樣品，必須設(shè)置 N+2 個提取，多出的一個是 PC（樣品制備陽 性對照），一個是 NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?10μL 陽性對照的 1 千倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此 作為 PC。另外用水作為 NC。

2. 用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)寄生蟲 DNA 提取 試劑盒兼容。 

二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（40μL 體系）

3. 對 N+2 個樣品，在 PCR 時需要增加一個 PCR 陽性對照和一個 PCR 陰性 對照，故需要設(shè)置 N+4 個反應(yīng)。在 N+4 個 PCR 管中分別加入下列成分： 

4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：

三、電泳檢測

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測 PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在 擴增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽 性對照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn)，陰性對照必須無任何擴增，否則實 驗無效。對沒有擴增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復 PCR 擴增以排除 PCR 抑制劑的感染。