人抗中性粒細胞顆粒抗體(ANGA)檢測試劑盒

本試劑僅供研究使用 

試驗原理：

ANGA試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知ANGA濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將TI物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中ANGA的活性濃度呈比例關系。

人抗中性粒細胞顆?？贵w(ANGA)檢測試劑盒試劑盒內(nèi)容及其配制

自備材料

1．  蒸餾水。

2．  加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。

3．  振蕩器及磁力攪拌器等。

安全性

1．  避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。

2．  實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

3．  不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

人抗中性粒細胞顆粒抗體(ANGA)檢測試劑盒操作注意事項

1．  試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。

2．  實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。

3．  不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

4．  使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。

5．  使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

6．  洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

7．  底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。

8．  加入試劑的順序應*，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。

9．  按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

樣品收集、處理及保存方法

1、  血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2、  血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3、  細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4、  保存------如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

人抗中性粒細胞顆粒抗體(ANGA)檢測試劑盒試劑的準備

1．  標準品：標準品的系列稀釋應在實驗時準備，不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行：

2．  洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

操作步驟

1．  使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。

2．  根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復孔的盡量做復孔。

3．  加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。

4．  甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。

5．  每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。

6．  甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。

7．  每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。

8．  取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結(jié)果。

9．  在450nm波長處測定各孔的OD值。

性能

1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.990。

2. 特異性：不與人其它細胞因子反應。

3. 重復性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

4.局限性：6號標準品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標準曲線無法得到精確的結(jié)果。

結(jié)果 判 斷 與 分 析

1、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應的ANGA標準品濃度為橫坐標（X），做得相應的曲線，樣品的ANGA含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。

3、檢測值范圍：0-400ng/ml

4、敏感度： 1.0ng/mlxy-E10080    【中文名稱】：人神經(jīng)細胞粘附分子配體1(NCAM-L1/CD171)ELISA試劑盒    【英文名稱】：Human neural cell adhesion molecule ligand 1 (NCAM-L1/CD171) ELISA kit    【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10081    【中文名稱】：人神經(jīng)保護因子(CVNPF)ELISA試劑盒    【英文名稱】：People neuroprotective factor (CVNPF) ELISA kit    【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10082    【中文名稱】：人可溶性腫瘤壞死因子α受體(sTNFαR)ELISA試劑盒    【英文名稱】：Human soluble tumor necrosis factor α receptor (sTNFαR) ELISA kit    【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10083    【中文名稱】：人可溶性細胞因子受體(sCKR)ELISA試劑盒    【英文名稱】：Human soluble cytokine receptors (sCKR) ELISA kit    【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10084    【中文名稱】：人可溶性凋亡相關因子配體(sFASL)ELISA試劑盒    【英文名稱】：Soluble Human apoptosis-related factor ligand (sFASL) ELISA kit    【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10085    【中文名稱】：人細胞凋亡抑制因子(IAP)ELISA試劑盒    【英文名稱】：The apoptosis inhibitory factor (IAP) ELISA Kit    【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10086    【中文名稱】：人集落刺激因子(CSF)ELISA試劑盒    【英文名稱】：Human colony-stimulating factor (CSF) ELISA kit    【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10087    【中文名稱】：人γ干擾素誘導單核細胞因子(MIGF/CXCL9)ELISA試劑盒    【英文名稱】：Human interferon- γ -induced monocyte factor (MIGF/CXCL9) ELISA kit    【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10088    【中文名稱】：人干擾素誘導T細胞趨化因子(ITAC/CXCL11)ELISA試劑盒    【英文名稱】：Human interferon-inducible T cell chemokine (ITAC/CXCL11) ELISA kit    【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10089    【中文名稱】：人CD14分子(CDl4)ELISA試劑盒    【英文名稱】：Human CD14 molecule (CDl4) ELISA kit    【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10090    【中文名稱】：人凋亡誘導因子(AIF)ELISA試劑盒    【英文名稱】：Human apoptosis-inducing factor (AIF) ELISA kit    【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10091    【中文名稱】：人白細胞共同抗原(LCA/CD45)ELISA試劑盒    【英文名稱】：Human leukocyte common antigen (LCA/CD45) ELISA kit    【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10092    【中文名稱】：人CD4分子(CD4)ELISA試劑盒    【英文名稱】：Human CD4 molecules (CD4) ELISA Kit    【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10093    【中文名稱】：人P鈣黏蛋白/胎盤鈣黏蛋白(P-cad)ELISA試劑盒    【英文名稱】：Human P -cadherin / placental cadherin (P-cad) ELISA kit    【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10094    【中文名稱】：人角化細胞生長因子(KGF)ELISA試劑盒    【英文名稱】：Human keratinocyte growth factor (KGF) ELISA Kit    【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10095    【中文名稱】：人血小板衍生生長因子BB(PDGF-BB)ELISA試劑盒    【英文名稱】：Human plaet -derived growth factor- BB (PDGF-BB) ELISA kit    【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10096    【中文名稱】：人CXC趨化因子配體16(CXCL16)ELISA試劑盒    【英文名稱】：Human CXC chemokine ligand 16 (CXCL16) ELISA Kit    【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10097    【中文名稱】：人CXC趨化因子受體3(CXCR3)ELISA試劑盒    【英文名稱】：Human CXC chemokine receptor 3 (CXCR3) ELISA kit    【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10098    【中文名稱】：人γ干擾素誘導蛋白16/p16(IFI16/p16)ELISA試劑盒    【英文名稱】：Human γ interferon -inducible protein 16/p16 (IFI16/p16) ELISA kit    【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10099    【中文名稱】：人基質(zhì)細胞衍生因子1a(SDF-1a/CXCL12)ELISA試劑盒    【英文名稱】：Human stromal cell derived factor- 1a (SDF-1a/CXCL12) ELISA kit    【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10100    【中文名稱】：人淋巴細胞趨化因子(Lptn/LTN/XCL1)ELISA試劑盒    【英文名稱】：Human lymphocyte chemokine (Lptn/LTN/XCL1) ELISA kit    【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10101    【中文名稱】：人α干擾素(IFN-α)ELISA試劑盒    【英文名稱】：Human interferon- α (IFN-α) ELISA kit    【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10102    【中文名稱】：人可溶性CD86(B7-2/sCD86)ELISA試劑盒    【英文名稱】：Human soluble CD86 (B7-2/sCD86) ELISA kit    【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10103    【中文名稱】：人白介素27(IL-27)ELISA試劑盒    【英文名稱】：Human interleukin- 27 (IL-27) ELISA kit    【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10104    【中文名稱】：人白介素23(IL-23)ELISA試劑盒    【英文名稱】：Human interleukin- 23 (IL-23) ELISA kit    【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10105    【中文名稱】：人巨噬細胞移動抑制因子(MIF)ELISA試劑盒    【英文名稱】：Human macrophage migration inhibitory factor (MIF) ELISA kit    【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10106    【中文名稱】：人組織因子途徑抑制物(TFPI)ELISA試劑盒    【英文名稱】：Human tissue factor pathway inhibitor (TFPI) ELISA kit    【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10107    【中文名稱】：人干擾素誘導蛋白10(IP-10/CXCL10)ELISA試劑盒    【英文名稱】：Human interferon -inducible protein 10 (IP-10/CXCL10) ELISA kit    【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10108    【中文名稱】：人白介素1(IL-1)ELISA試劑盒    【英文名稱】：Human interleukin- 1 (IL-1) ELISA Kit    【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10109    【中文名稱】：人白介素17(IL-17)ELISA試劑盒    【英文名稱】：Human interleukin- 17 (IL-17) ELISA kit    【靈敏度】：9.375pg/mL