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提取細胞質(zhì)和細胞核蛋白的操作步驟
點擊次數(shù)：7440 發(fā)布時間：2020-5-8
在細胞實驗中提取細胞質(zhì)和細胞核蛋白的操作步驟：
1.決定細胞生長狀態(tài)，細胞生長狀態(tài)應(yīng)該是80%或者更好；
2.用離心機以1500r/min離心5min；
3.棄上清液，用等體積的冷PBS洗細胞，像步驟2那樣，反復(fù)3次；
4.根據(jù)估計的沉淀量加入5倍體積的isotonic lysis buffer到細胞顆粒中，使細胞溫和懸浮，盡量避免泡沫；
5.加入裂解液lysis buffer在懸浮的細胞中，并放在冰上15min讓細胞膨脹，可以通過顯微鏡檢查；
6.對于細胞實驗中膨脹的細胞，加入10%的IGEPAL CA-630使*后的濃度達到0.3%，混勻，加的時候要溫和；
7. 立即離心（量大的可以用1.5mlde EP管，以5500r/min離心30s；量大的可以用50ml的管子以5500r/min離心2min）；
8.轉(zhuǎn)移上清液（細胞質(zhì)蛋白）到一個新的冷凍管中；
9.用懸浮顆粒5倍體積的isotonic lysis buffer懸浮細胞，并混勻；
10.用離心機離心細胞懸浮液，以1500r/min離心5min，移掉上清液；
11.用2/3倍體積的extraction buffer懸浮顆粒；
12.把管子放置在震蕩混勻器上，以700r/min，15min震蕩混勻，接著以1400r/min,15min,整個過程要仔細，避免泡沫產(chǎn)生；
13.以9400r/min離心15min，離心完后轉(zhuǎn)移上清液到一個新的冷凍離心管中；
14.分成幾份用液氮冷凍，并且保存起來（長期保存應(yīng)放在-80℃上，短期保存要放在-20℃上）。