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上海申知心生物科技有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： 高血脂癥動(dòng)物模型,心血管疾病動(dòng)物模型,缺血性心臟病動(dòng)物模型 |
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細(xì)胞劃痕
一、 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)原理
腫瘤細(xì)胞在體外仍具有遷移的能力。法是測(cè)定了腫瘤細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)特性的方法之一。其借鑒體外細(xì)胞致傷愈合實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，在體外培養(yǎng)的單層細(xì)胞上，劃痕致傷，然后比較不同實(shí)驗(yàn)組中腫瘤細(xì)胞遷移的能力。
二、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?nbsp;
用質(zhì)粒Oct-4-EGFP轉(zhuǎn)染后的A549細(xì)胞與正常細(xì)胞組、陰性對(duì)照組進(jìn)行比較分析，考察質(zhì)粒Oct-4-EGFP對(duì)A549細(xì)胞的遷移能力產(chǎn)生的影響。
三、 實(shí)驗(yàn)步驟
實(shí)驗(yàn)共分以下4個(gè)主要步驟：
1. 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞：
準(zhǔn)備A549細(xì)胞，轉(zhuǎn)染前一天按照70-80%密度鋪在6cm培養(yǎng)皿中。16h后，按照轉(zhuǎn)染試劑說(shuō)明書(shū)轉(zhuǎn)染細(xì)胞（8μg質(zhì)粒，20μL lipofectamine 2000轉(zhuǎn)染試劑） 。轉(zhuǎn)染24h后，重新鋪盤(pán)，密度為30-40%。
2. 劃線；
待細(xì)胞貼壁后，用200μL tip輕輕劃線，垂直90度，用力均勻，劃線處無(wú)細(xì)胞。
3. 細(xì)胞培養(yǎng)及拍照；
每隔3天換一次新鮮培養(yǎng)基。連續(xù)幾天倒置顯微鏡下100X下拍照，記錄細(xì)胞的遷移情況，直到細(xì)胞填滿劃痕處。
4. 統(tǒng)計(jì)分析。
劃線兩側(cè)間距為average gaps（AGs），使用Image-Pro Plus軟件分析各組細(xì)胞的AGs。
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