iTRAQ

     iTRAQ的4種同位素標(biāo)記試劑由４種相對(duì)分子質(zhì)量分別為114、115、116和117的報(bào)告基團(tuán)(reportergroup)，相對(duì)分子質(zhì)量分別為31、30、29 和28 的質(zhì)量平衡基團(tuán)(balancegroup)以及一個(gè)相同的肽反應(yīng)標(biāo)記試劑基團(tuán)(peptide reactivegroup)組成。不同的報(bào)告基團(tuán)分別與相應(yīng)的平衡基團(tuán)相配后，相對(duì)分子質(zhì)量均為145，即等量異位標(biāo)簽(isobaric tag)。
     將蛋白質(zhì)裂解為肽段，然后用試劑進(jìn)行差異標(biāo)記。由于試劑是等量的，即不同同位素在標(biāo)記同一多肽后在*級(jí)質(zhì)譜檢測(cè)，分子量相同，用串聯(lián)質(zhì)譜方法對(duì)在*級(jí)質(zhì)譜檢測(cè)到前體離子(precursorion)進(jìn)行碰撞誘導(dǎo)解離，產(chǎn)物離子通過(guò)第二級(jí)質(zhì)譜進(jìn)行分析。在二級(jí)質(zhì)譜分析過(guò)程中，報(bào)告基團(tuán)、質(zhì)量平衡基團(tuán)和多肽反應(yīng)基團(tuán)之間的鍵斷裂，質(zhì)量平衡基團(tuán)丟失，產(chǎn)生低質(zhì)荷比(m/z)的報(bào)告離子。由于二級(jí)質(zhì)譜可分析相對(duì)分子質(zhì)量相差1的報(bào)告基團(tuán)，不同報(bào)告基團(tuán)離子強(qiáng)度的差異就代表了它所標(biāo)記的多肽的相對(duì)豐度。同時(shí)，多肽內(nèi)的酰胺鍵斷裂，形成一系列b離子和y 離子，得到離子片段的質(zhì)量數(shù)，通過(guò)數(shù)據(jù)庫(kù)查詢(xún)和比較，可以鑒定出相應(yīng)的蛋白質(zhì)前體.

技術(shù)特點(diǎn):
1．可同時(shí)標(biāo)記2~8 個(gè)樣本。
2. 技術(shù)不僅可發(fā)現(xiàn)胞漿蛋白，還有膜蛋白、核蛋白、胞外蛋白。技術(shù)可檢測(cè)出低豐度蛋白、強(qiáng)堿性蛋白、小于10KD或大于200KD的蛋白。
3.可標(biāo)記修飾后的氨基酸，因此對(duì)磷酸化蛋白等翻譯后修飾蛋白進(jìn)行定性定量研究。
4.報(bào)告離子的相對(duì)分子質(zhì)量較低(113~121)，低分子量區(qū)是質(zhì)譜定性(質(zhì)量確定)和定量(豐度比較)較為準(zhǔn)確的區(qū)域，因此質(zhì)譜檢測(cè)更為靈敏可靠。

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