臨床級(jí)干細(xì)胞的建設(shè)與管理

臨床級(jí)干細(xì)胞庫是標(biāo)準(zhǔn)化收集、處理、儲(chǔ)存、檢測(cè)和分發(fā)不同來源的干細(xì)胞以及與干細(xì)胞相關(guān)的臨床、病理、治療、隨訪、知情同意等資料，并進(jìn)行質(zhì)量控制、信息管理與應(yīng)用的專門機(jī)構(gòu)或部門。以下是環(huán)揚(yáng)實(shí)驗(yàn)室對(duì)臨床級(jí)干細(xì)胞的建設(shè)與管理的詳細(xì)分析：

一、臨床級(jí)干細(xì)胞庫的建設(shè)

1. 規(guī)劃

• 臨床級(jí)干細(xì)胞庫的規(guī)劃需綜合考慮多方面因素，如國家政策導(dǎo)向、區(qū)域干細(xì)胞醫(yī)療市場(chǎng)需求、技術(shù)發(fā)展、建設(shè)的必要性、生產(chǎn)條件、經(jīng)濟(jì)效益、社會(huì)效益、風(fēng)險(xiǎn)等，進(jìn)行評(píng)價(jià)、分析和論證，以確定其可行性。

• 臨床級(jí)干細(xì)胞庫建設(shè)應(yīng)遵循國家法律法規(guī)及國際干細(xì)胞研究協(xié)會(huì)相關(guān)倫理原則，樣本采集與干細(xì)胞存儲(chǔ)須遵守《人類遺傳資源管理暫行辦法》，在人類遺傳資源辦批準(zhǔn)的范圍內(nèi)開展工作。

2. 選址

• 臨床級(jí)干細(xì)胞庫應(yīng)選擇安全、無干擾的獨(dú)立與封閉區(qū)域，遠(yuǎn)離嚴(yán)重污染（空氣、水、病原微生物、放射性同位素等），遠(yuǎn)離振動(dòng)/噪聲。

• 盡可能毗鄰樣本采集與臨床治療點(diǎn)，減少樣本的轉(zhuǎn)運(yùn)時(shí)間，便于及時(shí)處理與制備，實(shí)現(xiàn)流程無縫對(duì)接。

• 存儲(chǔ)區(qū)優(yōu)先選擇地面以上較低樓層，避免雨水/洪水倒灌，防霉防潮，保持良好的溫濕度。

3. 功能區(qū)規(guī)劃與管理

• 細(xì)胞制備的潔凈區(qū)域應(yīng)具備緩沖區(qū)、更衣室，滿足細(xì)胞的分離、擴(kuò)增與培養(yǎng)，各制備套間周圍設(shè)置潔凈的走廓，增加流程的靈活性。

• 細(xì)胞制備操作區(qū)應(yīng)設(shè)立潔凈區(qū)，根據(jù)《GB50073潔凈廠房設(shè)計(jì)規(guī)范》，潔凈區(qū)面積規(guī)劃一般為2~4m2/人，潔凈區(qū)滿足GMP要求，其設(shè)計(jì)、建設(shè)、管理、進(jìn)出、使用、清潔、消毒、環(huán)境檢測(cè)等參見《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》無菌藥品附錄。干細(xì)胞制劑的生產(chǎn)必須在B級(jí)背景下的潔凈區(qū)完成。

• 根據(jù)功能需求杜絕污染，必要時(shí)設(shè)置隔離區(qū)，避免隔離區(qū)的空氣進(jìn)入其他區(qū)域。為減少不同批次細(xì)胞在研究中的變異性，在制備階段應(yīng)對(duì)同一批特定代次的細(xì)胞建立多級(jí)細(xì)胞庫區(qū)，庫區(qū)應(yīng)防止混淆、差錯(cuò)和交叉污染。

• 核心功能區(qū)：涵蓋樣本與細(xì)胞收發(fā)室、制備與處理室、存儲(chǔ)區(qū)、質(zhì)檢室與總控室，必要時(shí)設(shè)置接待征詢室和采集室。

• 輔助功能區(qū)：包括辦公室、會(huì)議室、檔案室、庫房及洗消室等。

• 流程與流向：布局的流程與流向應(yīng)合理有序并明確標(biāo)識(shí)，設(shè)置人員、物料、細(xì)胞、污物流向與醫(yī)療廢棄物專用通道，確保生物安全，減少污染風(fēng)險(xiǎn)。為了便于樣本、試劑、物料與細(xì)胞制劑按規(guī)定的流程和流向傳遞，可在入口與出口處合理設(shè)置傳遞窗，提高工作效率。

4. 人員配備

• 應(yīng)建立與業(yè)務(wù)相適應(yīng)的組織架構(gòu)，明確管理路徑、職責(zé)、權(quán)限及相互關(guān)系，配備相應(yīng)資質(zhì)（職稱、學(xué)歷、培訓(xùn)和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)）的操作人員和管理人員。

• 對(duì)人員培訓(xùn)、考核并評(píng)估效果，采集人員需經(jīng)培訓(xùn)合格并持有醫(yī)師或護(hù)士執(zhí)業(yè)證書，采集信息雙人復(fù)核；制備人員應(yīng)進(jìn)行無菌服穿戴的培訓(xùn)；制備、質(zhì)量管理負(fù)責(zé)人與質(zhì)量受權(quán)人不得相互兼任。如個(gè)別崗位職責(zé)需委托他人，受委托人應(yīng)同樣滿足該崗位職責(zé)的資質(zhì)要求，委托人仍然承擔(dān)最終責(zé)任。

5. 設(shè)施與設(shè)備

• 應(yīng)為所有設(shè)施設(shè)備設(shè)計(jì)充足合理的空間，根據(jù)各區(qū)域面積及功能規(guī)劃供暖、通風(fēng)（自然/壓力）、空調(diào)、水電、照明、滅菌、監(jiān)控、溫濕度、氧濃度、消防、污水與醫(yī)療廢棄物處理系統(tǒng)等，并定期清潔、維保、校準(zhǔn)和質(zhì)檢，制定應(yīng)急預(yù)案。

• 存儲(chǔ)庫區(qū)應(yīng)充分考慮樓面承重，設(shè)施設(shè)備規(guī)劃與安全管理遵循《ISBER最佳實(shí)踐2018》，如配備雙路供電或應(yīng)急發(fā)電設(shè)施及備用存儲(chǔ)空間、冷鏈監(jiān)控等；縮短液氮塔到庫區(qū)的距離，減少氮?dú)獾暮膿p；液氮與干冰區(qū)域應(yīng)配備氣體監(jiān)測(cè)器、聲光報(bào)警和排風(fēng)系統(tǒng)，一旦房間內(nèi)氧濃度低于設(shè)定的下按規(guī)定時(shí)間自動(dòng)啟動(dòng)強(qiáng)排風(fēng)，液氮區(qū)地面杜絕使用磁磚，優(yōu)選耐低溫的環(huán)氧樹脂，冰箱區(qū)應(yīng)充分考慮散熱，必要時(shí)安裝專用散熱通道。操作人員應(yīng)配備厚型隔熱手套、護(hù)目鏡/面具以及防護(hù)外套以確保安全。

• 干細(xì)胞制劑的存儲(chǔ)須杜絕交叉污染，設(shè)置合格、待檢與不合格區(qū)且標(biāo)識(shí)明顯；集約設(shè)計(jì)監(jiān)控裝置，實(shí)現(xiàn)24小時(shí)溫度連續(xù)監(jiān)控及遠(yuǎn)程報(bào)警，確保液體供氣系統(tǒng)不間斷供氣及外置塔的安全運(yùn)轉(zhuǎn)（儲(chǔ)存、調(diào)壓、氣化等），設(shè)置保護(hù)圍欄和安全警示標(biāo)識(shí)并定期安全檢查，校驗(yàn)供氣管道與遠(yuǎn)程液位監(jiān)控系統(tǒng)。對(duì)于液氮補(bǔ)給罐或液氮輸送系統(tǒng)所有閥門、壓力表與安全閥應(yīng)定期檢查（年檢或強(qiáng)檢），確保系統(tǒng)連續(xù)平穩(wěn)、安全節(jié)氣。液氮設(shè)備的運(yùn)行與維修人員應(yīng)具備《特種行業(yè)資格證》，可外包給專業(yè)公司進(jìn)行檢修。

• 所有設(shè)備應(yīng)建檔受控，專人管理且標(biāo)識(shí)明顯，分光光度計(jì)、移液器、天平、離心機(jī)等需定期進(jìn)行計(jì)量檢定與校準(zhǔn)。實(shí)驗(yàn)室要備的安全設(shè)施（通風(fēng)櫥、防塵罩、滅火器、洗眼噴淋裝置等）應(yīng)定期進(jìn)行檢查。

二、臨床級(jí)干細(xì)胞庫的管理

1. 采集管理

• 采集前需對(duì)供者進(jìn)行入組篩查和傳染病因子檢測(cè)，包括人類免疫缺陷病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人類嗜T細(xì)胞病毒、EB病毒、巨細(xì)胞病毒、梅毒螺旋體等。

• 篩查合格的供者簽署知情同意書后，遵循標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程采集樣本，將污染、感染和病原體傳播的風(fēng)險(xiǎn)降低。

2. 制備管理

• 臨床級(jí)干細(xì)胞的制備應(yīng)嚴(yán)謹(jǐn)、審慎并進(jìn)行獨(dú)立審查和監(jiān)督，確保其安全性和有效性。即使對(duì)細(xì)胞進(jìn)行最小的體外操作都有可能引入額外風(fēng)險(xiǎn)，如病原體污染、培養(yǎng)代數(shù)增加導(dǎo)致的細(xì)胞基因型和表型不穩(wěn)定，在長(zhǎng)期、壓力環(huán)境下可能會(huì)變?yōu)榉钦扼w或發(fā)生DNA重組、缺失及其他基因或表觀遺傳異常，從而帶來嚴(yán)重病理改變，如癌癥。

• 故臨床級(jí)干細(xì)胞的制備應(yīng)遵循GMP程序，防止原料和產(chǎn)品在生產(chǎn)過程中被污染，所有試劑與制備過程均應(yīng)遵守質(zhì)量控制體系與規(guī)程，確保試劑質(zhì)量、制備工藝與制定的方案保持一致，形成細(xì)胞鑒定、純度和潛能分析標(biāo)準(zhǔn)。而對(duì)于傳染病因子陽性的干細(xì)胞制備需在獨(dú)立設(shè)置的陽性間進(jìn)行。

3. 檢驗(yàn)管理

• 利用干細(xì)胞庫資源開展臨床研究必須遵循科學(xué)與倫理，保護(hù)受試者權(quán)益，符合《藥物臨床試驗(yàn)質(zhì)量管理規(guī)范》、《干細(xì)胞臨床試驗(yàn)研究管理辦法（試行）》和《干細(xì)胞制劑質(zhì)量控制及臨床前研究指導(dǎo)原則（試行）》。

• 過程中的關(guān)鍵性物料必須做到先驗(yàn)證性能，確保有效性且符合國家相關(guān)規(guī)定。直接與原始樣本及干細(xì)胞制劑接觸的物料必須無菌且對(duì)人體無害并符合要求的級(jí)別，盡可能使用藥用級(jí)別的物料。記錄使用的關(guān)鍵物料，確?？赏暾麥?zhǔn)確地追蹤到每個(gè)環(huán)節(jié)中物料的詳細(xì)信息，包括使用的試劑/耗材/設(shè)備清單、生產(chǎn)廠家、批次號(hào)、合格證等，關(guān)鍵試劑如血清、酶和生長(zhǎng)因子的分析證書（certificate of analysis，COA）副本，測(cè)試過程和結(jié)果等。

4. 存儲(chǔ)管理

• 應(yīng)監(jiān)測(cè)生物安全柜、潔凈室的顆粒及生物負(fù)載系統(tǒng)，包括高效微?？諝膺^濾系統(tǒng)、A/B潔凈室內(nèi)的空調(diào)凈化系統(tǒng)。

• 應(yīng)規(guī)定監(jiān)測(cè)頻率和監(jiān)測(cè)項(xiàng)目，如靜態(tài)和動(dòng)態(tài)下的懸浮粒子、沉降菌、浮游菌、表面微生物、壓差、風(fēng)速、溫濕度等。

• 對(duì)于B級(jí)背景下應(yīng)采用在線塵埃粒子監(jiān)測(cè)系統(tǒng)懸浮粒子。

• 定期清洗和更換初、中效過濾器，并定期在工作狀態(tài)下對(duì)高效過濾器進(jìn)行檢漏，以防止損傷和泄漏。

綜上所述，臨床級(jí)干細(xì)胞庫的建設(shè)與管理是一項(xiàng)復(fù)雜而細(xì)致的工作，需要綜合考慮多個(gè)方面。通過科學(xué)規(guī)劃、嚴(yán)格管理、先進(jìn)技術(shù)等方面的努力，可以確保臨床級(jí)干細(xì)胞庫的安全、高效和可持續(xù)發(fā)展。