上海依赫生物科技有限公司專業(yè)生產(chǎn)ELISA試劑盒

小鼠去甲腎上腺素（NE） ELISA檢測試劑盒

用途： 用于小鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中去甲腎上腺素（NE）的測定。

檢測原理

本試劑盒采用的是生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定樣品中小鼠去甲腎上腺素（NE） 的水平。向預(yù)先包被了小鼠去甲腎上腺素（NE） 單克隆抗體的酶標(biāo)孔中加入去甲腎上腺素（NE） ，溫育；溫育后，加入生物素標(biāo)記的去甲腎上腺素（NE） 抗體，再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合，形成免疫復(fù)合物，再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶，然后加入底物A、B，產(chǎn)生藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺與樣品中小鼠去甲腎上腺素（NE） 的濃度呈正相關(guān)。

小鼠去甲腎上腺素（NE） ELISA檢測試劑盒廠家

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試劑盒組成 

	名  稱	96孔配置 12孔×8條	48孔配置 12孔×4條	備  注
1	標(biāo)準(zhǔn)品（500pg/ml)	0.5ml	0.5ml	稀釋即用型
2	酶標(biāo)包被板	1塊	1塊	已包被即用型
3	標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液	3ml	3ml	即用型
4	鏈霉親和素-HRP	6ml	3ml	即用型
5	30x倍濃縮洗滌液	20ml	20ml	蒸餾水稀釋
6	生物素標(biāo)記的抗去甲腎上腺素（NE）  抗體	2ml	2ml	即用型
7	顯色劑A液	6ml	3ml	即用型
8	顯色劑B液	6ml	3ml	即用型
9	終止液	6ml	3ml	即用型
10	說明書	1份	1份	即用型
11	封板膜	2張	2張	不可反復(fù)使用
12	密封袋	1個	1個	即用型

小鼠去甲腎上腺素（NE） ELISA檢測試劑盒批發(fā)廠家

需要而未提供的試劑和器材

• 酶標(biāo)儀(450nm檢測波長濾光片，570nm或630nm校正波長濾光片) 。
• 洗板機(jī)（可調(diào)注液量，保證每孔洗液加至0.35ml而不溢出）。
• 超凈工作臺，生物安全柜，通風(fēng)柜。
• 高精度單道加液器（量程為0.5-10μl, 2-20μl,20-200μl,200-1000μl).
• 高精度多道加液器（8道或12道，量程為50-300μl).
• 37℃恒溫箱。
• 低溫離心機(jī)。
• 電冰箱（4℃,-20℃,-86℃）.

9.  漩渦混合儀，低頻振蕩器等

小鼠去甲腎上腺素（NE） ELISA檢測試劑盒供應(yīng)商

注意事項

• 從2-8℃取出的試劑盒，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
• 嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
• 為避免交叉污染，要避免重復(fù)使用手中的吸頭和封板膜。
• 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
• 底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。

6.   所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按生物廢棄物處理。終止液為2M硫酸，使用時必須注意安全。

7.  各步驟加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校準(zhǔn)其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

8.  每次試驗測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔zui高濃度的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n）。

9.  配制試劑時，要用旋渦混合儀混勻。加入孔內(nèi)的試劑，充分混勻?qū)y試結(jié)果尤為重要，使用微量振蕩器(使用zui低頻率)，如無微量振蕩器，可在反應(yīng)前手工輕輕晃動酶標(biāo)板1分鐘，例如做圓周動作，使加入孔中的反應(yīng)液混勻。

10.  實驗用酶標(biāo)儀應(yīng)嚴(yán)格按使用說明書規(guī)范操作，并在使用前充分預(yù)熱。

11.  手工洗板應(yīng)注意：甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此過程數(shù)次。自動洗板：如果有自動洗板機(jī)，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中。

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樣本要求

1．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

2．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存或根據(jù)存放，時間做相應(yīng)溫度調(diào)整，但應(yīng)避免反復(fù)凍融，（由于樣本種類過多，每個單位處理方式不一樣，本說明書不做詳細(xì)介紹）。

 

操作程序

• 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：（本試劑系統(tǒng)提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶請按照說明自行在小試管中倍比稀釋）按下表格執(zhí)行：

250pg/ml	（5號標(biāo)準(zhǔn)品）	120μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
125pg/ml	（4號標(biāo)準(zhǔn)品）	120μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
62.5pg/ml	（3號標(biāo)準(zhǔn)品）	120μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
31.2pg/ml	（2號標(biāo)準(zhǔn)品）	120μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
15.6pg/ml	（1號標(biāo)準(zhǔn)品）	120μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

• 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
• 加樣：1）空白孔：（空白對照孔不加樣品，生物素標(biāo)記的抗去甲腎上腺素（NE） 抗體，鏈霉親和素-HRP，其余各步操作相同 ；2）標(biāo)準(zhǔn)品孔:加入標(biāo)準(zhǔn)品50μl，鏈霉親和素-HRP50μl（標(biāo)準(zhǔn)品中已事先整合好生物素標(biāo)記抗體，故在操作時不加，只加鏈霉素-HRP）；3）樣本反應(yīng)孔：加入樣本40μl，然后各加入抗去甲腎上腺素（NE） 抗體10μl、鏈霉親和素-HRP（空白孔除外）50μl。蓋上封板膜，輕輕振蕩混勻，37℃溫育60分鐘。
• 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋備用。
• 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
• 顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘。
• 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
• 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后10分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

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結(jié)果判斷

1.  每個標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本的OD值應(yīng)減去零孔的OD值。（若不減零孔值，標(biāo)準(zhǔn)曲線的零孔應(yīng)相交于Y軸） 

2. 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對應(yīng)的OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種熟悉應(yīng)用軟件來計算。

3．手工繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，OD值作縱坐標(biāo)，以平滑線連接各標(biāo)準(zhǔn)品的坐標(biāo)點。通過標(biāo)本的OD值可在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出其濃度。推薦使用專業(yè)制作曲線軟件進(jìn)行分析計算結(jié)果。

4．若標(biāo)本OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限，應(yīng)適當(dāng)稀釋后重測，計算濃度時應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)。

 

操作總結(jié)

 

準(zhǔn)備試劑，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品

         

 

加入準(zhǔn)備好的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品，生物素標(biāo)記二抗和酶標(biāo)試劑，37℃反應(yīng)60分鐘。

 

 

洗板5次，加入顯色液A、B,37℃顯色10分鐘

 

 

   加入TMB終止液

 

 

10分鐘內(nèi)酶標(biāo)儀測OD值

 

 

  計算待測樣本因子含量

試劑盒性能

1.  準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值，大于等于0.9200。
2.  靈敏度：zui小可檢測濃度達(dá)，1.05pg/ml。
3.  特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
4.  重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。

5 . 回收率：70-110%.

6. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。

7. 有效期：6個月

8. 檢測范圍： 480pg/ml -3.9pg/ml

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