詳細介紹
做ELISA的經(jīng)驗總結: 1、包被原的性質很重要,蛋白濃度,是否降解,這關系到你做出的抗體可不可以被其識別,所以保存抗原很重要,做重組蛋白時,一定要在冰浴下緩慢融化就是這個道理。2、加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時。然后洗滌。(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。 3、加酶標抗體:于各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小時,洗滌。 4、加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分鐘。 5、終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。在批放行前,每一批酶聯(lián)免疫試劑都完成37℃熱穩(wěn)定性試驗,試驗結果符合產(chǎn)品的質量標準,以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質量可控。 酶聯(lián)免疫試劑盒研制生產(chǎn)過程中所用的工作液一般包括:包被液、封閉液、陰性陽性對照、樣品稀釋液、洗滌液、酶結合物或酶稀釋液、底物或底物緩沖液、終止液等,對定量檢測試劑,還包括標準品(或校準品)溶液。各種工作液在配制過程中嚴格按質量標準中的配方進行配制,充分混勻確保液體中的各種成分均勻,同時進行相應的質量檢驗并達到質量標準后,方可使用。