氯乙suanAS-D萘酚酯酶染色實驗

氯乙suanAS-D萘酚酯酶染色實驗
實驗方法原理：細胞內(nèi)酯酶水解合成的底物萘酚酯（一種萘的衍生物）而釋放出萘酚，并迅速與重氮鹽偶聯(lián)結(jié)果在酶活性部位有明亮色彩的沉淀物出現(xiàn)

實驗步驟：

一、實驗試劑：

(一)底物混合液

（１）0.067mol/L  磷酸鹽緩沖液（PH7.6）

（２）六偶氮化新品紅（hexoliaed  new   fuchsin）溶液（新鮮配制）

①溶解新品紅（new  fuchisn）1g于2mol/L鹽酸液25ml中，溶液可保存。

②40g/L亞硝酸鈉溶液，4℃保存，每周必須新鮮配制，使用前將等體積新品紅溶液和40g/L亞硝酸鈉溶液混合，反應(yīng)1min此液好為六偶氮化新品紅

③氯乙suan萘酚AS－D液：取氯乙suan萘酚AS－D（naphthol AS－D　hcloroacetate）5mg溶于N，N－二甲基酰胺N，N－dimeth for mamide）2.5ml中。

④將氯化萘酚AS－D溶液2.5ml和六偶氮化新品紅0.25ml加至0.067mol/L磷酸鹽緩沖液47.5ml中測PH值并調(diào)節(jié)至7.4不需要即可使用。

（二）復(fù)染液：取harris蘇木素（含少量明礬）復(fù)染液100ml，加冰乙酸4ml，混勻。

（三）稀氨水洗液：每100ml蒸餾水中加入濃氨水（28%）0.2－0.3ml混勻。

二、 實驗操作：

1. 將己固定好的血片或骨髓片放入底物混合液中，在高溫溫１育10min后，用流水沖洗．

2. 用復(fù)染液復(fù)染10min

3. 用稀氨水洗液沖洗玻片直至顏色由紅變藍

4. 迅速用流水沖洗，空氣中干燥后油鏡檢查。

三、 實驗結(jié)果判定：陽性反應(yīng)為紅色顆粒．定位于胞漿中