可溶性淀粉合成酶的測(cè)定原理！

可溶性淀粉合成酶的測(cè)定原理！

SSS（EC 2.4.1.21）通常以游離態(tài)存在于質(zhì)體基質(zhì)中，催化淀粉鏈延長(zhǎng)，主要負(fù)責(zé)支鏈淀粉的合成。

檢測(cè)原理：

SSS催化ADPG與淀粉引物(葡聚糖)反應(yīng)，將葡萄糖分子轉(zhuǎn)移到淀粉引物上，同時(shí)生成ADP，在反應(yīng)體系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶依次催化NADP⁺還原為NADPH，NADPH生成量與前一步反應(yīng)中ADP生成量呈正比，340nm下測(cè)定NADPH增加量即可計(jì)算SSS活性。

活性計(jì)算：

1、按樣本蛋白濃度計(jì)算：

單位的定義：每mg組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1nmol NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。

GBSS活性（U/mg prot）＝樣本稀釋倍數(shù)（6.5）÷反應(yīng)時(shí)間(2min)÷NADPH消光系數(shù)（6.22×10^-3）×ΔA÷蛋白質(zhì)濃度（mg/mL）=522×ΔA÷蛋白質(zhì)濃度（mg/mL）。

2、按照樣本鮮重計(jì)算

單位的定義：每g組織在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1nmol NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。

GBSS活性（U/g 鮮重）=樣本稀釋倍數(shù)（6.5）÷反應(yīng)時(shí)間(2min)÷NADPH消光系數(shù)（6.22×10^-3）×ΔA÷樣本鮮重(g/mL) =522×ΔA÷樣本鮮重(g/mL)

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