高脂樣本蛋白裂解液使用注意事項(xiàng)

高脂樣本蛋白裂解液使用注意事項(xiàng)

描述：
高脂樣本蛋白裂解液采用優(yōu)化配比，特別適用于脂質(zhì)含量高的樣本，對(duì)動(dòng)物細(xì)胞胞膜、胞漿、胞核成分有較強(qiáng)裂解作用，使用高脂樣本蛋白裂解液特別適于提取膜蛋白以及western blot實(shí)驗(yàn)等

儲(chǔ)存：
4 ℃保存 12個(gè)月有效

制備細(xì)胞裂解產(chǎn)物
1. 800g 4℃離心5分鐘收集培養(yǎng)細(xì)胞，估計(jì)細(xì)胞離心后的體積（PCV, 106 cells=~20 ml, 107 cells =~100 ml PCV）；
2. 每50-100 ml PCV加入5倍體積RIPA裂解緩沖液（250-500 ml）,冰浴中放置10分鐘，并每隔5分鐘在漩渦混合儀上振蕩30秒；
3. 12000g 4℃離心10分鐘，將上清轉(zhuǎn)移到新的離心管中，即得細(xì)胞總蛋白產(chǎn)物；
4. 假如所得蛋白產(chǎn)物較為粘稠，95℃加熱5分鐘，然后迅速冰浴5分鐘，12000g 4℃離心10分鐘，將上清轉(zhuǎn)移到新的離心管中，即得細(xì)胞總蛋白產(chǎn)物。

制備組織裂解產(chǎn)物
1. 取50-100 mg組織在冰上剪成碎片，用預(yù)冷的PBS洗滌2次離心棄去PBS；
2. 加入 0.5-1 ml 預(yù)冷 RIPA 裂解緩沖液；
3. 4℃用玻璃勻漿器勻漿20-40次，直到95％的細(xì)胞被破碎，然后在冰浴中放置10分鐘，并每隔5分鐘在漩渦混合儀上振蕩30秒；
4. 12000g 4℃離心10分鐘，將上清轉(zhuǎn)移到新的離心管中，即得組織總蛋白產(chǎn)物；
5. 假如所得蛋白產(chǎn)物較為粘稠，95℃加熱5分鐘，然后迅速冰浴5分鐘，12000g 4℃離心10分鐘，將上清轉(zhuǎn)移到新的離心管中，即得組織總蛋白產(chǎn)物；
6. 20％的甘油保存于 -70oC 或-20oC。

注意：
1. 在轉(zhuǎn)移上清液時(shí)不要吸入底部的沉淀物；
2. 高脂樣本蛋白裂解液中未加入蛋白酶抑制劑。