溶菌酶檢測試盒說明書

一、測定原理：
在一定濃度的混濁菌液中，由于溶菌酶能水解細(xì)菌細(xì)胞壁上肽聚糖使細(xì)菌裂解而濃度降低，透光度增強(qiáng)，故可以根據(jù)透光度變化來推測溶菌酶的含量。

二、試劑組成及配制 (30T/28樣)
1、試劑組成：
試劑一：菌粉，5mg×4支，2～8℃干燥保存，有效期6個月。
試劑二：菌粉溶劑，100ml×1瓶，2～8℃保存，并每月放微波爐中溫消毒20秒，有效期6個月。
試劑三：標(biāo)準(zhǔn)品，粉劑2mg×1支（活力為8萬單位/mg），2～8℃干燥保存，有效期6個月。
[注]：試劑盒嚴(yán)格按照上述方法保存有效期可延至一年。
2、試劑配制：
（1）、貯備菌液的配制：
取5mg/支的菌粉1支，倒入勻漿管中，加菌粉溶劑1ml，輕輕緩慢上下旋轉(zhuǎn)研磨3分鐘（切勿濺出），即為貯備菌液，將其取出后置2～8℃冰箱密封保存一周左右。
（2）、應(yīng)用菌液的配制：
按貯備菌液:菌粉溶劑=1:19進(jìn)行配制，需多少配多少。剩下的應(yīng)用菌液2～8℃可保存一周左右。是現(xiàn)用現(xiàn)配，用時搖勻。
（3）、標(biāo)準(zhǔn)品的配制：
①、標(biāo)準(zhǔn)品貯備液的配制：
每支準(zhǔn)確加雙蒸水1.0ml配成2mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)品貯備液。2～8℃可保存7～10天。
②、標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)用液的配制：
臨用時按標(biāo)準(zhǔn)品貯備液∶雙蒸水=1∶799比例稀釋成2.5μg/ml（即200U/ml）的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)用液，需多少配多少。2～8℃保存，可保存7～10天。
附錄Ⅰ：自身對照法測定溶菌酶
（適用于樣本數(shù)量較少，或者樣本有混濁或有顏色，如血液紅色）
[注]：本法用分光光度計(jì)530nm處,1cm光徑比色皿測得是樣本或標(biāo)準(zhǔn)的透光度值

1、操作步驟
①、將配制好的應(yīng)用菌液，標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液及所需檢測的樣本均放入37℃水浴箱中預(yù)溫5分鐘
以上。使菌液，標(biāo)準(zhǔn)液及檢測樣本的溫度達(dá)到37℃。
②、將可見分光光度計(jì)于530nm處,1cm光徑比色皿,以雙蒸水調(diào)透光度100% (比色皿準(zhǔn)備兩只,一只用于調(diào)透光度100%,一只用于測定)。
③、往相應(yīng)編號的試管中加入0.2ml待測樣本，取2ml應(yīng)用菌液迅速沖入試管中，立即混勻并計(jì)時。(標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)用液取0.2ml雙蒸水,加入2ml應(yīng)用菌液,其它操作與測定相同)
④、迅速倒入比色皿中在可見分光光度計(jì)530nm處比濁，5秒時讀取透光度值T0, 比色皿不要取出，在2 分5秒時讀取透光度值T2；
[注]：如5秒時來不及讀數(shù)，可20秒時讀取調(diào)透光度值T0,在2 分20秒時讀取透光度值T2，標(biāo)準(zhǔn)管需同樣操作。
⑤、求出2次透光度的差值（△T= T2-T0）。
[注]：用同一比色皿每檢測一個樣本后均要用雙蒸水沖洗干凈，才可再放第二個樣本或標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)用液。