通用基因組DNA提取試劑盒使用說明書

產(chǎn)品簡介：

本試劑盒為通用型，適合于從土壤，糞便，昆蟲，以及其他樣本中提取基因組DNA。對細菌，真菌，昆蟲等樣本都具有很好的裂解效果，zui大限度的保留了生物DNA的多態(tài)性。
使用本試劑盒提取的DNA產(chǎn)量大、完整性好，可直接用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR 、文庫構(gòu)建、Southern 雜交等實驗。

操作步驟：

使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶上的標簽。所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。

1、樣品的處理：
1）土壤：稱取0.1-0.3g (根據(jù)干濕)土壤，放入研缽中，倒入適量的液氮，立即研磨，重復(fù)3 次，使土壤顆粒研成粉末，加500ul溶液A，振蕩至*懸浮。
2）糞便：稱取0.1-0.3g (根據(jù)干濕) 糞便，加500ul溶液A，振蕩至*懸浮。
3）昆蟲：稱取0.1-0.3g昆蟲，倒入適量的液氮，立即研磨，重復(fù)3次，使昆蟲研成粉末，加500ul溶液A，振蕩至*懸浮。
4）未知樣品，如為細未狀，可直接稱取0.1-0.3g(根據(jù)干濕)加500ul溶液A，如為塊狀，可0.1-0.3g用液氮研磨成粉未，再加500ul溶液A，振蕩至*懸浮。
2、向懸浮液中加入20ul的RNase A（10mg/ml），55℃放置10min。
3、加入20ul的蛋白酶K（10mg/ml），充分混勻，55℃水浴消化，30min。消化期間可顛倒離心管混勻數(shù)次，12000轉(zhuǎn)離心10min。將上清轉(zhuǎn)移到一個新的離心管中。如有沉淀，可再次離心。
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4、加入500ul溶液B，充分混勻。如出現(xiàn)白色沉淀，于55℃放置5min，沉淀即會消失，不影響后續(xù)實驗。如溶液未變清亮，說明樣品消化不*，可能導(dǎo)致提取的DNA量少及不純，還有可能導(dǎo)致上柱后堵柱子，請增加消化時間。
5、加入500ul無水乙醇，充分混勻，此時可能會出現(xiàn)絮狀沉淀，不影響DNA的提取，可將溶液和絮狀沉淀都加入吸附柱中，放置2min (分兩次加入，每次700ul)。
6、12000rpm離心2min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。
7、向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇)，12000rpm離心1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。
8、向吸附柱中加入600ul漂洗液，12000rpm離心1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中
9、12000rpm離心2min，將吸附柱置于室溫或50℃溫箱放置數(shù)分鐘，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，否則漂洗液中的乙醇會影響后續(xù)的實驗如酶切、PCR等。
10、將吸附柱放入一個干凈的離心管中，向吸附膜中央懸空滴加50-200ul經(jīng)65℃水浴預(yù)熱的洗脫液，室溫放置5min，12000rpm離心2min。
11、離心所得洗脫液再加入吸附柱中，室溫放置2min，12000rpm離心2min，即可得到高質(zhì)量的基因組DNA。 :

注意事項：

1、由于樣品不同，zui終提取的DNA含量和純度也有所不同，一般來說，如果所提取DNA用電泳的方法檢測不到，PCR會有結(jié)果，樣品盡可能的新鮮。否則會導(dǎo)致提取的DNA片段較小且提取量也下降。
2、若試劑盒中的溶液出現(xiàn)沉淀，可在65℃水浴中重新溶解后再使用，不影響提取效果。
3、如果樣品消化不*，后面的離心步驟中可能會出現(xiàn)堵柱子的情況，可適當(dāng)延長離心時間。
4、洗脫緩沖液的體積不少于50ul，體積過小會影響回收效率；洗脫液的pH值對洗脫效率也有影響，若需要用水做洗脫液應(yīng)保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調(diào)至此范圍)，pH值低于7.0會降低洗脫效率；DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃，以防DNA降解。
5、DNA濃度及純度檢測（濃度較高時）：得到的基因組DNA片段的大小與樣品保存時間、操作過程中的剪切力等因素有關(guān)?；厥盏玫降腄NA片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。DNA應(yīng)在OD260處有顯著吸收峰， OD260值為1相當(dāng)于大約50μg/ml雙鏈DNA、40μg/ml單鏈DNA。OD260/OD280比值應(yīng)為1.7-1.9，如果洗脫時不使用洗脫緩沖液，而使用去離子水，比值會偏低，因為pH值和離子存在會影響光吸收值，但并不表示純度低。