糖原含量試劑盒說(shuō)明書

糖原含量試劑盒說(shuō)明書

測(cè)定意義：
糖原是由葡萄糖單位構(gòu)成的高分子多糖，是糖的主要的儲(chǔ)存形式之一，主要貯存在肝和肌肉
中作為備用能量，分別稱為肝糖原和肌糖原。肝糖原可調(diào)節(jié)血糖濃度，當(dāng)血糖升高時(shí)可在肝
臟合成糖原，血糖降低時(shí)，肝糖原則分解為葡萄糖以補(bǔ)充血糖。因此，肝糖原對(duì)維持血糖的
相對(duì)平衡十分重要。肌糖原是肌肉中糖的儲(chǔ)存形式,在劇烈運(yùn)動(dòng)消耗大量血糖時(shí)，肌糖原不
能直接分解成血糖，必須先分解產(chǎn)生乳酸,隨血液循環(huán)到肝臟,通過(guò)糖異生轉(zhuǎn)變?yōu)楦翁窃蚱?br />萄糖。

測(cè)定原理：
蒽酮法。利用強(qiáng)堿性提取液提取糖原，在強(qiáng)酸性條件下利用蒽酮顯色劑測(cè)定糖原含量。

需自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、濃硫酸（不允許快遞）和蒸
餾水。

試劑的組成和配制：
提取液：液體50mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：0.1mg/mL 的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液 10mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1 瓶， 4℃保存；

糖原提?。?br />1﹑細(xì)胞或細(xì)菌：收集500~1000 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；加入0.75mL 提
取液超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30 次）；轉(zhuǎn)移至
10mL 試管中，95℃水浴20min（蓋緊，防止水分散失），隔5min 振搖試管1 次，使充分混
勻；取出試管冷卻后，用蒸餾水定容到5ml，混勻，8000g 25℃離心10min，取上清液待測(cè)。
2﹑組織：稱取0.1~0.2g 樣品，加入0.75ml 提取液充分勻漿；轉(zhuǎn)移至10ml 試管中；95℃水
浴20min（蓋緊，防止水分散失），隔5min 振搖試管1 次，使充分混勻；待組織全部溶解后，
取出試管冷卻后，用蒸餾水定容到5ml，混勻，8000g 25℃離心10min，取上清液待測(cè)。

步驟和加樣表
1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至620nm，蒸餾水調(diào)零。
2、調(diào)節(jié)水浴鍋至95℃。
3、試劑二工作液的配制：在試劑二中倒入10mL 蒸餾水，緩慢倒入40mL 濃硫酸，充分溶
解混勻后使用；用不完的試劑4℃保存一周；
4、加樣表（在EP 管中反應(yīng)）：
試劑（μL） 空白管 標(biāo)準(zhǔn)管 測(cè)定管
糖原提取液 250
試劑一 250
蒸餾水 250
試劑二 1000 1000 1000
混勻，95℃水浴10min（蓋緊，防止水分散失），冷卻，于620nm 波長(zhǎng)處，以蒸餾水調(diào)零，
分別讀取空白管、標(biāo)準(zhǔn)管和測(cè)定管吸光度，分別記為A1、A2 和A3。