小鼠睪酮（Testosterone）酶聯(lián)免疫分析 試劑盒使用說明書

ELISA 簡介
ELISA 是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡稱。自上
世紀70 年代初問世以來，發(fā)展十分迅速，目前已被廣泛用于生物學和醫(yī)學科學的許多領域。
ELISA 的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結合在固相載體表面的抗原
或抗體仍保持其免疫學活性，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。
在測定時，受檢標本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗
滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質分開。再加入酶標記的抗
原或抗體，也通過反應而結合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一
定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產物，產物的量與標本中受檢物質
的量直接相關，故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地
放大了免疫反應的結果，使測定方法達到很高的敏感度。

操作步驟
1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
240nmol/L 5 號標準品150μl 的原倍標準品加入150μl 標準品稀釋液
120nmol/L 4 號標準品150μl 的5 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
60nmol/L 3 號標準品150μl 的4 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
30nmol/L 2 號標準品150μl 的3 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
15nmol/L 1 號標準品150μl 的2 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待
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測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl， 然
后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不
觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
4. 配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此
重復5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
10 分鐘。
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白孔調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應在加終止液
后15 分鐘以內進行。