探究?jī)?nèi)毒素對(duì)生物應(yīng)用的影響

   內(nèi)毒素強(qiáng)烈影響DNA轉(zhuǎn)染到原代細(xì)胞和敏感的培養(yǎng)細(xì)胞中，并且增加的內(nèi)毒素水平導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率急劇降低。此外，使用不含內(nèi)毒素的質(zhì)粒DNA用于基因治療是極其重要的，因?yàn)閮?nèi)毒素可引起動(dòng)物和人發(fā)燒、內(nèi)毒素性休克綜合征和補(bǔ)體級(jí)聯(lián)的活化。內(nèi)毒素還通過(guò)激活非特異性免疫應(yīng)答，干擾體外轉(zhuǎn)染到巨噬細(xì)胞、B細(xì)胞等免疫細(xì)胞中。這些反應(yīng)包括免疫介質(zhì)如IL-1和前列腺素的誘導(dǎo)合成。確保塑料制品、培養(yǎng)基、血清和質(zhì)粒DNA沒(méi)有LPS污染，避免誤導(dǎo)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

內(nèi)毒素測(cè)定方法

    經(jīng)典的內(nèi)毒素測(cè)定基于內(nèi)毒素與鱟變形細(xì)胞中的可凝結(jié)蛋白之間的凝血反應(yīng)?，F(xiàn)在可使用更靈敏的光度測(cè)定（例如，來(lái)自BioWhittaker,Inc的Kinetic-QCL Test），其基于鱟變形細(xì)胞溶胞產(chǎn)物（LAL）和合成的產(chǎn)生顏色的底物。LPS污染通常以?xún)?nèi)毒素單位（EU）表示。通，1ng LPS對(duì)應(yīng)于1-10EU。

內(nèi)毒素去除

   如今，內(nèi)毒素的去除都會(huì)使用商業(yè)化的試劑盒。一般利用多粘菌素B（polymixin B ）連接到瓊脂糖微球上，進(jìn)行特異性去除內(nèi)毒素。多粘菌素B可通過(guò)靜電作用、離子作用、親水作用和分子之間的相互作用等多種因素吸附內(nèi)毒素，從而達(dá)到內(nèi)毒素去除的目的。

   在內(nèi)毒素去除過(guò)程中，我們要切記使用不含內(nèi)毒素的塑料制品和玻璃器皿。為了避免在初始內(nèi)毒素去除后對(duì)質(zhì)粒DNA的再污染，建議僅使用經(jīng)認(rèn)證無(wú)熱原或無(wú)內(nèi)毒素的新塑料制品。無(wú)內(nèi)毒素或無(wú)熱原的塑料制品可以從許多不同的供應(yīng)商處獲得。內(nèi)毒素強(qiáng)烈粘附于玻璃器皿，并且在洗滌期間難以*除去。標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室高壓滅菌方法對(duì)內(nèi)毒素水平幾乎沒(méi)有或沒(méi)有影響。此外，如果高壓鍋先前已用于細(xì)菌，則玻璃器皿將被內(nèi)毒素分子廣泛污染。180°C加熱玻璃器皿可破壞任何附加的內(nèi)毒素分子。重要的是不要通過(guò)使用含內(nèi)毒素的試劑純化無(wú)內(nèi)毒素DNA，所有緩沖液都需要無(wú)內(nèi)毒素。