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外泌體提取實(shí)驗(yàn)

服務(wù)介紹：

　　外泌體(exosome)：是細(xì)胞主動(dòng)向胞外分泌的大小均一(40-200nm)的囊泡樣小體，該囊泡可攜帶多種蛋白質(zhì)、mRNA、miRNA等，參與細(xì)胞通訊、細(xì)胞遷移、血管新生和腫瘤細(xì)胞生長等過程。根據(jù)外泌體的大小和密度，用不同的離心速度，達(dá)到分離出外泌體的超速(差速)離心法，是學(xué)術(shù)上用的比較多且較認(rèn)可的外泌體的提取方法，被認(rèn)為是外泌體提取的黃金方法。

Ref: Huilin Shao et al,New Technologies for Analysis of Extracellular Vesicles,Chem.Rev. 2018,118:1917-1950

　　外泌體應(yīng)用領(lǐng)域：

　　外泌體參與不同細(xì)胞間的物質(zhì)傳輸和信號傳遞;

　　外泌體具備一些免疫調(diào)節(jié)功能(由于有大量免疫相關(guān)分子：抗原傳遞分子、熱休克蛋白等);

　　外泌體參與細(xì)胞廢物的排泄和處理;

　　不同來源的外泌體有其特異性，存在著不一樣的功能;

　　外泌體已廣泛的被用在醫(yī)學(xué)臨床疾病的診斷以及相關(guān)預(yù)防研究上;

　　外泌體可能被當(dāng)做一種藥物的載體等

　　實(shí)驗(yàn)流程：

　　低速離心去除碎片-過濾-高速離心-超速離心-蛋白濃度檢測

注：外泌體提取后，可另收費(fèi)進(jìn)行電鏡負(fù)染和WB檢測（tsg101，cd9，cd63三選二）

外泌體提取實(shí)驗(yàn)

　　送樣運(yùn)輸要求：

　　細(xì)胞上清樣本：一個(gè)樣本提供70ml的培養(yǎng)上清(細(xì)胞在含常規(guī)FBS培養(yǎng)基中培養(yǎng)一定時(shí)間，待細(xì)胞融合度約為60% - 70%時(shí)，移去原有含FBS的培養(yǎng)基，換成新鮮的含無外泌體血清的培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)3天左右，細(xì)胞融合度達(dá)到80%-95%左右時(shí)，收取細(xì)胞上清），干冰運(yùn)輸?shù)綄?shí)驗(yàn)室。

　　血清樣本：血液經(jīng)普通采集后室溫靜置30min，3000g離心15min，收集上層血清，5ml，-80℃純干冰運(yùn)輸。