制備辣根過氧化物酶（HRP）半抗原標記物的簡單介紹

西安齊岳生物提供辣根過氧化物酶(HRP)標記前列腺素E2、前列腺素A2、氯磺隆、、、雌二醇、睪酮、孕酮、生育酚、B6、A、膽鈣化醇、麥角鈣化甾醇、、黃素單核苷酸、核黃素、、新二氫查爾酮、重樓皂苷、松香酸、香草酸、漢、、辣椒素、、蘆丁、等小分子科研。

過氧化物酶HRP是什么？

過氧化物酶（Horseradish Peroxidase,HRP），通常來源于辣根（因此稱辣根過氧化物酶），是臨床檢驗試劑中的常用酶。該產品不但用于多個生化檢測項目，也運用于類（ELISA）試劑盒。HRP分布于植物界，它是由無色的酶蛋白和棕色的鐵卟啉結合而成的糖蛋白,糖含量18%。HRP由多個同功酶組成,分子量為40,000,等電點為pH3~9 ,酶催化的適PH因供氫體不同而稍有差異，但多在pH5左右。酶溶于水和58%以下的硫酸銨溶液。用半抗原科研與酶偶聯(lián)、制備半抗原酶標記物時,通常要求半抗原與酶的克分子比率在10左右。比率過高,會導致復合物中酶含量降低,因而削弱檢測信號強度。相反，如果比例過低 ，也會因空間屏蔽作用酶標半抗原與抗體的反應而降低測定的靈敏度。

辣根過氧化物酶標記方法

酶標記抗體的制備方法主要有兩種，即戊二醛交聯(lián)法和過碘酸鹽氧化法。

辣根過氧化物酶的標記常用過碘酸鹽氧化法，這種方法法只適用于含糖量較高的酶。過碘酸鈉將HRP分子表面的多糖氧化為醛基，醛基與抗體分子上的氨基形成Schiff堿而結合。后者可進一步用NaBH (或乙醇胺)還原生成穩(wěn)定的酶標記抗體。

HRP的NalO4標記法.

原理: HRP為一種糖蛋白(glycoprotein), 其所帶的糖基上的糖環(huán)能被氧化開環(huán)，在2,3-位的一C-C-斷開。在適當的氧化條件下，2, 3-位羥基能被氧化為醛基。醛基在堿性條件下可與被標記物的自由氨基(-NH2)形成Shiff堿(-N=CH-), Shiff 堿不穩(wěn)定，可由逆反應解離。Shiff 堿可由還原劑還原成一CH2一NH一，在HRP與被標記物間形成穩(wěn)定的共價交聯(lián)oHRP的NalO4標記法所用氧化劑為NalO4,還原劑采用NaBH4。

為了HRP的過度氧化，在整個標酶的過程中應盡量避光。光照可加快過碘酸鈉對HRP糖基的氧化，如在標記過程中不避光，則不可控因素太多。

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