法醫(yī)DNA實(shí)驗(yàn)室的DNA污染和防范
    法醫(yī)DNA新技術(shù)的應(yīng)用和發(fā)展使得DNA檢驗(yàn)靈敏度不斷提高,法醫(yī)DNA實(shí)驗(yàn)室的DNA污染問(wèn)題引起人們關(guān)注。為了有效地避免DNA污染,獲得穩(wěn)定、可靠的檢驗(yàn)結(jié)果,法醫(yī)DNA實(shí)驗(yàn)室要建立嚴(yán)格的防污染措施和相應(yīng)的污染監(jiān)測(cè)體系來(lái)防范DNA污染,一旦發(fā)現(xiàn)DNA污染,還要查找原因,提出解決方案。

1 DNA污染及來(lái)源

    DNA污染(DNAcontamination)是指生物物證檢材在提取或檢驗(yàn)過(guò)程中混有含DNA的外源生物物質(zhì),造成DNA檢驗(yàn)的結(jié)果發(fā)生改變。DNA污染屬于物證污染的一種,但與其它的污染有所不同。由于目前常用的法醫(yī)DNA技術(shù)是針對(duì)現(xiàn)場(chǎng)提取到的、與人有關(guān)的各種生物物證進(jìn)行檢驗(yàn),具有人的種屬特異性(humanspecies2specific),這里提到的外源DNA(exogenousDNA)一般特指人基因組DNA,而不是其它的非人DNA。在生物物證檢材保存過(guò)程中如果保存方法不當(dāng),樣本中存在的微生物DNA等非人DNA,可能會(huì)造成物證DNA的降解,從而影響檢驗(yàn)結(jié)果,但是在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)利用現(xiàn)有的DNA檢驗(yàn)方法檢測(cè)不到非人DNA,不會(huì)造成DNA污染。

    法醫(yī)DNA實(shí)驗(yàn)室中的外源DNA有3個(gè)來(lái)源[3]:

    1)檢驗(yàn)技術(shù)人員的DNA;

    2)實(shí)驗(yàn)室其它樣本中含有的DNA;

    3)檢驗(yàn)過(guò)程中的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物或等位基因標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照物(allelicladder)。由實(shí)驗(yàn)室內(nèi)技術(shù)人員自己的DNA引起的DNA污染稱(chēng)作自身污染(selfcontamination),多是由于操作人員在檢驗(yàn)過(guò)程中的疏忽造成;由實(shí)驗(yàn)室內(nèi)其它樣本DNA引起的DNA污染稱(chēng)作交叉污染(crosscontamination),多是由于檢材保管或提取DNA時(shí)操作不當(dāng)造成;由PCR擴(kuò)增產(chǎn)物或等位基因標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照物引起的DNA污染稱(chēng)作PCR污染(PCRcontamination),多是由于實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)、管理或操作不當(dāng)造成。

    當(dāng)技術(shù)人員自身的DNA在實(shí)驗(yàn)室用具或消耗品等物品上時(shí),自身污染也可以是通過(guò)交叉污染的方式造成(PCR污染也是同樣)。

2 實(shí)驗(yàn)室防污染措施

    每個(gè)人在日常生活中都被DNA包圍著,人的任何活動(dòng)都有可能留下DNA,對(duì)DNA檢驗(yàn)造成污染。有些DNA污染,能夠通過(guò)重新的檢驗(yàn)加以糾正,而有些污染(如對(duì)極少量物證檢材的污染)則可能造成不可彌補(bǔ)的損失,所以對(duì)于DNA污染,法醫(yī)DNA實(shí)驗(yàn)室要重在預(yù)防,建立一整套完善的防污染的制度,

并嚴(yán)格貫徹執(zhí)行。

2.1 實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境和設(shè)施

    法醫(yī)DNA實(shí)驗(yàn)室對(duì)環(huán)境和設(shè)施嚴(yán)格控制,實(shí)行分區(qū)域管理和定期清潔制度,是避免DNA污染的有效手段。

2.1.1 實(shí)驗(yàn)室分區(qū) 由于法醫(yī)DNA檢驗(yàn)的高靈敏性,為了防止檢驗(yàn)過(guò)程中的交叉污染,法醫(yī)DNA實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立實(shí)驗(yàn)室分區(qū)和*進(jìn)入制度,各區(qū)域間的通風(fēng)、排氣系統(tǒng)不得混用,無(wú)關(guān)人員不得進(jìn)入實(shí)驗(yàn)區(qū)域,不同區(qū)域的實(shí)驗(yàn)設(shè)備及器械不得混用。

    DNA實(shí)驗(yàn)室的分區(qū)域管理,能夠保證在不同的實(shí)驗(yàn)區(qū)域內(nèi)完成不同的檢驗(yàn),按照DNA含量由少到多的順序,實(shí)現(xiàn)檢材和樣本的單方向流動(dòng)。DNA實(shí)驗(yàn)室必須設(shè)置案件受理和檢材保管區(qū)、樣品DNA提取區(qū)、DNA擴(kuò)增區(qū)、DNA檢測(cè)區(qū)[4],有條件的實(shí)驗(yàn)室還應(yīng)設(shè)置初檢區(qū)、結(jié)果分析區(qū)、準(zhǔn)備區(qū)等,其中DNA擴(kuò)增區(qū)和檢測(cè)區(qū)還應(yīng)設(shè)置緩沖區(qū),供技術(shù)人員更換工作服。對(duì)于微量DNA的檢驗(yàn),如接觸DNA等,由于檢材含有的DNA量少,更存在污染的危險(xiǎn),要設(shè)置專(zhuān)門(mén)的DNA提取區(qū)域。

    PCR污染是法醫(yī)DNA實(shí)驗(yàn)室的特點(diǎn),也是實(shí)驗(yàn)室污染防范的重點(diǎn)。在PCR擴(kuò)增產(chǎn)物或等位基因標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照物中含有高濃度的DNA目的片段,極少的量就會(huì)被檢測(cè)到,實(shí)驗(yàn)室一旦發(fā)生此類(lèi)污染,將很難清除,后果嚴(yán)重。對(duì)實(shí)驗(yàn)室實(shí)行分區(qū)管理,嚴(yán)格按要求操作,能夠有效地預(yù)防污染發(fā)生,其中重點(diǎn)要對(duì)DNA檢測(cè)區(qū)進(jìn)行嚴(yán)格管理。含有擴(kuò)增產(chǎn)物或?qū)φ瘴锏碾x心管只能在DNA檢測(cè)區(qū)打開(kāi),不允許帶出該區(qū)域;處理檢測(cè)區(qū)的廢物時(shí)要封裝嚴(yán)密;技術(shù)人員進(jìn)出該區(qū)域要更換工作服。

2.1.2 實(shí)驗(yàn)室清潔 做好實(shí)驗(yàn)室的清潔工作是防止DNA實(shí)驗(yàn)室內(nèi)發(fā)生交叉污染的有效途徑。造成DNA交叉污染的原因多種多樣,主要是物證檢材之間或比對(duì)樣本與物證檢材之間的相互污染。DNA交叉污染的方式可以是直接接觸造成,也可以是通過(guò)一定的載體使外源DNA發(fā)生轉(zhuǎn)移造成,使DNA檢驗(yàn)結(jié)果錯(cuò)誤;前者容易發(fā)現(xiàn)和預(yù)防,后者則較難發(fā)現(xiàn)和預(yù)防,這要求實(shí)驗(yàn)室要做到定期清潔和消毒。

    實(shí)驗(yàn)室的清潔范圍包括對(duì)工作臺(tái)面、儀器設(shè)備表面、重復(fù)使用的工具或器皿等的清潔。工作臺(tái)面重點(diǎn)部位包括實(shí)驗(yàn)室受理檢材的柜臺(tái)、DNA提取工作臺(tái)、吸取DNA的超凈臺(tái)和檢材存儲(chǔ)柜等都是容易接觸并DNA的區(qū)域;儀器設(shè)備主要有離心機(jī)的轉(zhuǎn)頭、提取DNA用的加熱塊、擴(kuò)增儀的樣品槽、移液器桿的吸孔、遺傳分析儀的加樣槽等;重復(fù)使用的工具或器皿主要有剪取檢材樣本使用的剪刀及鑷子、配制試劑所用的試劑瓶等。

    實(shí)驗(yàn)室清潔主要是采用擦拭清洗的辦法,先用新鮮配制的10%漂白液(7mM次氯酸鈉溶液)將需要清理物體的表面反復(fù)擦拭,再用75%乙醇擦洗以去除殘留物,可以有效清除它們表面附著的各種污染物,條件允許的情況下定時(shí)進(jìn)行紫外燈照射消毒[5]。實(shí)驗(yàn)室除要建立定期清潔制度外,一旦發(fā)現(xiàn)在檢驗(yàn)過(guò)程中有可能發(fā)生DNA污染時(shí),要及時(shí)清理和清潔。

2.2 技術(shù)人員的操作

    在各種情況下,實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確、可靠,先要依賴(lài)于實(shí)驗(yàn)室內(nèi)技術(shù)人員的操作,應(yīng)該說(shuō)技術(shù)人員是影響DNA鑒定結(jié)果的主要因素。技術(shù)人員在進(jìn)行DNA檢驗(yàn)的過(guò)程中要時(shí)刻樹(shù)立防污染的意識(shí),警惕任何可能造成DNA污染的操作和步驟,嚴(yán)格按照操作要求進(jìn)行檢驗(yàn),才能達(dá)到防止污染的目的。2.2.1 個(gè)人防護(hù)

    法醫(yī)DNA實(shí)驗(yàn)室內(nèi)技術(shù)人員說(shuō)話或咳嗽時(shí)飛濺的唾液、脫落的頭皮屑等含有大量的DNA,在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中都可能造成自身DNA的污染,所以技術(shù)人員要采取個(gè)人保護(hù)措施,防止污染發(fā)生。由于DNA檢驗(yàn)技術(shù)人員本身在檢驗(yàn)過(guò)程中不注意或操作不當(dāng)造成的DNA污染并不少見(jiàn)。2004年,美國(guó)華盛頓犯罪實(shí)驗(yàn)室在調(diào)查23起DNA檢驗(yàn)造成錯(cuò)誤鑒定的原因時(shí),發(fā)現(xiàn)其中8起案件是由于技術(shù)人員自身DNA污染造成,另有8起由于DNA交叉污染造成[6]。

    DNA實(shí)驗(yàn)室內(nèi)技術(shù)人員在檢材交接、保存、初檢及提取DNA時(shí),必須穿戴好實(shí)驗(yàn)室工作服、一次性手套、面罩(或口罩)、發(fā)罩(或帽子);進(jìn)行其它檢驗(yàn)操作時(shí),也必須穿工作服、戴手套,進(jìn)出DNA擴(kuò)增區(qū)及檢測(cè)區(qū)時(shí),還應(yīng)在緩沖區(qū)更換工作服,防止空氣中含有擴(kuò)增產(chǎn)物的氣溶膠顆粒被帶入其它區(qū)域造成污染。

2.2.2 器具和消耗材料的使用

    DNA檢驗(yàn)使用的各種器具和消耗材料都有可能是攜帶外源DNA的載體,操作中如果不慎會(huì)造成DNA污染。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,要盡量使用一次性用品或器具,其中包括手套、移液用的吸頭、離心管等;使用的手套在接觸可能含有DNA的物品后要及時(shí)更換,當(dāng)打電話、觸摸計(jì)算機(jī)鍵盤(pán)等時(shí)要除去手套;重復(fù)使用的器具,如剪刀、鑷子等,處理物證檢材后要及時(shí)更換;實(shí)驗(yàn)區(qū)內(nèi)備用的離心管、吸頭、剪刀、鑷子、干凈的棉簽拭子等用具要封裝嚴(yán)密;為了防止移液器頭部的DNA污染,還可以使用防止氣霧的吸頭(aero2solresistanttip)。

2.2.3 DNA提取

    從檢材樣本中提取DNA是DNA檢驗(yàn)的開(kāi)始,也是容易造成DNA自身污染和交叉污染的步驟。為了避免DNA污染,現(xiàn)場(chǎng)提取物證檢材和比對(duì)樣本提取DNA時(shí)要分開(kāi)在不同區(qū)域操作,對(duì)于不具備條件的實(shí)驗(yàn)室,也要分開(kāi)在不同時(shí)間分別提取物證檢材和比對(duì)樣本DNA;處理物證檢材時(shí),不要把多件檢材放在一起,一次只應(yīng)處理一件物證檢材,不要把檢材直接放在工作臺(tái)面上,每次都要放置新的襯紙墊,做到及時(shí)更換襯紙墊和手套;提取DNA時(shí),先處理檢材DNA含量少的物證,再處理檢材DNA含量多的物證,

防止造成DNA量少的物證檢材的污染。

2.2.4 DNA擴(kuò)增和檢測(cè)

    DNA擴(kuò)增和產(chǎn)物檢測(cè)的過(guò)程中要注意避免PCR污染的產(chǎn)生。擴(kuò)增時(shí),由于樣品多,要注意不要加錯(cuò)樣,把已加樣完的樣品移離原來(lái)的位置,與未加樣樣品分開(kāi),可以防止此類(lèi)錯(cuò)誤,有條件的實(shí)驗(yàn)室,可使用自動(dòng)化工作站;打開(kāi)含有DNA的離心管前要在離心機(jī)中瞬時(shí)離心,以使溶液處于管底,防止開(kāi)蓋時(shí)溶液滲出或飛濺;DNA檢測(cè)區(qū)的一切物品,尤其是含擴(kuò)增產(chǎn)物的離心管?chē)?yán)禁帶入DNA提取區(qū)和擴(kuò)增區(qū)。

2.3 試劑及消耗品的防污染質(zhì)量控制

    法醫(yī)DNA實(shí)驗(yàn)室所使用的試劑及消耗品的質(zhì)量能否滿(mǎn)足要求是保證DNA檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確的基礎(chǔ)。2002年,英國(guó)法庭科學(xué)服務(wù)中心(FSS)的DNA實(shí)驗(yàn)室在DNA檢驗(yàn)中曾因離心管被生產(chǎn)工人的DNA污染而導(dǎo)致錯(cuò)誤地串并數(shù)起刑事案件,誤導(dǎo)了案件的調(diào)查[7],使我們認(rèn)識(shí)到質(zhì)量控制(qualitycontrol,QC)的重要性。

    DNA實(shí)驗(yàn)室為了在檢驗(yàn)中獲得準(zhǔn)確、可靠的結(jié)果,在關(guān)鍵試劑和消耗材料使用前要對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量控制檢驗(yàn),確認(rèn)其指標(biāo)合格后才能用于DNA檢驗(yàn)。DNA實(shí)驗(yàn)室的關(guān)鍵試劑主要是指DNA純化試劑盒和STR復(fù)合擴(kuò)增試劑盒,關(guān)鍵消耗材料是指離心管、吸頭、棉簽拭子等。對(duì)于不同批次的試劑或消耗材料,必須對(duì)每一批次分別進(jìn)行質(zhì)控檢驗(yàn);對(duì)于同一批次的試劑或消耗材料只需對(duì)隨機(jī)抽取的樣品進(jìn)行質(zhì)控檢驗(yàn)。質(zhì)控檢驗(yàn)是用質(zhì)控對(duì)象分別對(duì)已知DNA分型的陽(yáng)性對(duì)照(posi2tivecontrol)和不含DNA的陰性對(duì)照(negativecontrol)進(jìn)行DNA檢驗(yàn),如果陽(yáng)性對(duì)照的結(jié)果分型正確,陰性對(duì)照的結(jié)果不含譜帶,就表明質(zhì)控對(duì)象合格。質(zhì)控合格的試劑或消耗材料要標(biāo)記質(zhì)控日期和有效期,再用于DNA檢驗(yàn)。

3 實(shí)驗(yàn)室DNA污染監(jiān)測(cè)和發(fā)現(xiàn)

    DNA實(shí)驗(yàn)室一旦發(fā)生DNA污染,就會(huì)產(chǎn)生錯(cuò)誤的結(jié)論,這就要求實(shí)驗(yàn)室要有一套監(jiān)測(cè)和發(fā)現(xiàn)DNA污染的措施,通常采取設(shè)置對(duì)照樣本、核查DNA圖譜質(zhì)量、建立DNA排查庫(kù)等辦法加以解決[8]。值得一提的是這些檢測(cè)污染的方法起不到預(yù)防DNA污染的作用,只是能夠發(fā)現(xiàn)檢驗(yàn)過(guò)程中存在的一些污染,但不能夠發(fā)現(xiàn)所有的DNA污染。

3.1 設(shè)置對(duì)照樣本

    在DNA檢驗(yàn)過(guò)程中,平行設(shè)置不同類(lèi)型對(duì)照樣本的檢驗(yàn),根據(jù)檢驗(yàn)結(jié)果來(lái)判斷在操作中是否存在DNA污染,是對(duì)法醫(yī)DNA實(shí)驗(yàn)室DNA污染進(jìn)行監(jiān)測(cè)的好方法,實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)人員必須按照要求進(jìn)行操作。2002年,美國(guó)的聯(lián)邦調(diào)查局(FBI)的DNA實(shí)驗(yàn)室發(fā)生的技術(shù)人員未按照操作規(guī)范進(jìn)行陰性對(duì)照檢驗(yàn),無(wú)法確定在檢驗(yàn)過(guò)程中是否有DNA污染的存在,導(dǎo)致百余起案件重新鑒定,一些DNA結(jié)果從DNA數(shù)據(jù)庫(kù)中被刪除,一些物證檢材因沒(méi)有檢驗(yàn)條

件而無(wú)法做出鑒定結(jié)論,嚴(yán)重影響了FBI的聲譽(yù)[9]。

    DNA檢驗(yàn)中設(shè)置的對(duì)照樣本有陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照兩種。

3.1.1 陰性對(duì)照

    陰性對(duì)照,又稱(chēng)空白對(duì)照(blankcontrol),是指平行實(shí)驗(yàn)中設(shè)置的不含DNA

樣品的檢驗(yàn),主要有PCR陰性對(duì)照、試劑空白對(duì)照和檢材空白對(duì)照三種。PCR陰性對(duì)照是在PCR反應(yīng)時(shí)用水代替模板DNA進(jìn)行反應(yīng)的對(duì)照,主要用于監(jiān)測(cè)PCR反應(yīng)體系和PCR檢驗(yàn)過(guò)程中DNA污染情況;試劑空白對(duì)照是使用所有檢驗(yàn)試劑平行對(duì)空白樣品進(jìn)行檢驗(yàn)的對(duì)照,主要用于監(jiān)測(cè)檢驗(yàn)全過(guò)程所用試劑的DNA污染情況;檢材空白對(duì)照是對(duì)空白檢材的載體樣本(不含檢材斑跡的載體)進(jìn)行平行檢驗(yàn)的對(duì)照,主要用于監(jiān)測(cè)載體樣本的DNA污染情況,這在ABO血型等檢驗(yàn)中常用,在DNA檢驗(yàn)中較少用。陰性對(duì)照的檢驗(yàn)結(jié)果應(yīng)該沒(méi)有DNA譜帶,一旦發(fā)現(xiàn)結(jié)果中有譜帶出現(xiàn),就表明有DNA污染的存在。

    陰性對(duì)照可以監(jiān)測(cè)檢驗(yàn)中發(fā)生的系統(tǒng)污染,但對(duì)于發(fā)生在特定樣品檢驗(yàn)中的偶然污染無(wú)能為力,還要靠其它的監(jiān)測(cè)辦法。

3.1.2 陽(yáng)性對(duì)照

    陽(yáng)性對(duì)照是指在平行實(shí)驗(yàn)中設(shè)置已知分型的DNA樣本,主要用于監(jiān)測(cè)DNA分型結(jié)果的可靠性和準(zhǔn)確性。用于陽(yáng)性對(duì)照的DNA樣本可以使用參考標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),如A9947或K562等[10],也可以使用實(shí)驗(yàn)室中已知分型的自制DNA樣本。當(dāng)陽(yáng)性對(duì)照的檢驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生多余的等位基因時(shí),表明有DNA污染的存在。

3.2 核查DNA圖譜質(zhì)量

    核查DNA檢驗(yàn)結(jié)果的圖譜質(zhì)量是發(fā)現(xiàn)是否存在DNA污染的又一方法。核查DNA圖譜的方法主要是看DNA結(jié)果中是否有多余的譜帶或明顯不符合邏輯的結(jié)果。以下幾種情況值得注意:

1)對(duì)于等位基因標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照物污染的情況比較容易發(fā)現(xiàn),在某一或某些基因座的分型結(jié)果中如果包含的等位基因如同Ladder一樣,就要考慮可能發(fā)生Ladder的污染。

    這是實(shí)驗(yàn)室中發(fā)生的比較嚴(yán)重的一類(lèi)污染,一般多發(fā)生在PCR反應(yīng)的操作中。

2)對(duì)于已知嫌疑人的比對(duì)樣本,只應(yīng)該是一個(gè)人的DNA圖譜,如果結(jié)果中發(fā)現(xiàn)有明顯多余的譜帶存在,就要考慮有DNA污染的發(fā)生。

3)當(dāng)核查DNA圖譜時(shí),如果發(fā)現(xiàn)人員樣本與DNA檢驗(yàn)結(jié)果在性別上不同時(shí),要加以注意是否存在DNA污染或弄錯(cuò)樣本編號(hào)的情況。

4)在DNA檢驗(yàn)結(jié)果中,不是只要有多余的譜帶都是由于DNA污染造成的,有些多余譜帶是與生物技術(shù)或檢測(cè)技術(shù)相關(guān)的,如影子帶(stutter)、加A不*、熒光洇滲(pull2up)、模板量太多等造成,要注意加以區(qū)別和分析[11]。5)陰性對(duì)照發(fā)生污染時(shí),要注意核查檢驗(yàn)樣本的DNA分型是否含有陰性對(duì)照污染的等位基因。

3.3 DNA數(shù)據(jù)庫(kù)的檢索比對(duì)

    DNA檢驗(yàn)結(jié)果的數(shù)字化使得DNA數(shù)據(jù)庫(kù)的建設(shè)發(fā)展迅速,利用DNA數(shù)據(jù)庫(kù)的自動(dòng)比對(duì)功能,把DNA實(shí)驗(yàn)室獲得的所有DNA分型進(jìn)行數(shù)據(jù)庫(kù)管理,可以發(fā)現(xiàn)DNA實(shí)驗(yàn)室中可能存在的一些污染。

3.3.1 DNA排查數(shù)據(jù)庫(kù)

    DNA排查數(shù)據(jù)庫(kù)(elim2inationdatabase)是儲(chǔ)存需要排除的相關(guān)人員DNA分型的數(shù)據(jù)庫(kù),用于監(jiān)測(cè)和發(fā)現(xiàn)DNA檢驗(yàn)結(jié)果是否受到相關(guān)的現(xiàn)場(chǎng)或?qū)嶒?yàn)室人員污染。英國(guó)的DNA數(shù)據(jù)庫(kù)(NDNAD)是世界上早、大、發(fā)揮作用數(shù)據(jù)庫(kù),其中建立了現(xiàn)場(chǎng)警員排除庫(kù)(PED)、實(shí)驗(yàn)室人員排除庫(kù)(SED)和耗材生產(chǎn)人員排除庫(kù)(MED),用于檢查實(shí)驗(yàn)室的DNA檢驗(yàn)結(jié)果是否受到相關(guān)人員的污染[12]。許多DNA實(shí)驗(yàn)室都建立技術(shù)人員的DNA分型數(shù)據(jù)庫(kù),用于檢測(cè)技術(shù)人員自身的DNA污染,但是在國(guó)內(nèi),目前還未建立現(xiàn)場(chǎng)勘查人員和耗材生產(chǎn)人員的DNA排查庫(kù),無(wú)法對(duì)這些人員進(jìn)行排查,只在特殊案件的檢驗(yàn)結(jié)果中才會(huì)考慮進(jìn)行個(gè)案排查。

3.3.2 同批次樣本間的比對(duì)

    DNA交叉污染和樣品

    編號(hào)混淆也是DNA實(shí)驗(yàn)室中偶爾發(fā)生的問(wèn)題,對(duì)同批次檢驗(yàn)樣本間的DNA分型結(jié)果進(jìn)行比對(duì)可以用來(lái)發(fā)現(xiàn)此類(lèi)錯(cuò)誤。英國(guó)FSS使用的I23分析管理軟件就具有這一功能,對(duì)同批次檢驗(yàn)的DNA結(jié)果相互比對(duì),發(fā)現(xiàn)可疑的比中記錄后進(jìn)行認(rèn)真的核查來(lái)確定每次檢驗(yàn)的大量樣本間是否存在交叉污染的情況。對(duì)于國(guó)內(nèi)的DNA實(shí)驗(yàn)室,可以在出具鑒定結(jié)論之間,將DNA分型先錄入DNA數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行自動(dòng)比對(duì),如果發(fā)現(xiàn)DNA分型相同的樣本來(lái)自同批次檢驗(yàn),且前期沒(méi)有相互關(guān)聯(lián)的信息,就要進(jìn)行認(rèn)真的核查。

4 DNA污染的糾正

    DNA污染的結(jié)果會(huì)影響DNA鑒定的質(zhì)量,降低鑒定結(jié)果證據(jù)價(jià)值,嚴(yán)重時(shí)會(huì)造成鑒定結(jié)論錯(cuò)誤,產(chǎn)生錯(cuò)案。DNA實(shí)驗(yàn)室一旦發(fā)現(xiàn)有DNA污染的存在,就要認(rèn)真查找污染源,分析造成的原因,提出解決方案,同時(shí)還要對(duì)這一時(shí)期獲得的DNA數(shù)據(jù)進(jìn)行復(fù)核,查找是否存在未被發(fā)現(xiàn)的污染情況。

    DNA實(shí)驗(yàn)室在查找污染原因時(shí),可以設(shè)計(jì)一系列的陰性對(duì)照試驗(yàn)對(duì)檢驗(yàn)過(guò)程中使用的所有試劑逐一進(jìn)行排查,丟棄發(fā)現(xiàn)有問(wèn)題的試劑;也有的實(shí)驗(yàn)室為了方便,丟棄污染時(shí)所有使用過(guò)的試劑,重新配制新試劑進(jìn)行檢驗(yàn)。DNA污染發(fā)生后,還要清潔所有的工作臺(tái)面和儀器設(shè)備表面。

    當(dāng)DNA實(shí)驗(yàn)室發(fā)生的PCR污染不是由于試劑原因造成,結(jié)果又難以解釋時(shí),要考慮PCR產(chǎn)物形成氣溶膠造成污染的情況,這類(lèi)污染往往難于去除。小的DNA分子達(dá)到一定數(shù)量時(shí)很可能會(huì)包含在氣溶膠的顆粒上,污染DNA擴(kuò)增區(qū)域的環(huán)境,從而造成PCR污染。實(shí)驗(yàn)室一旦發(fā)生PCR污染,要對(duì)擴(kuò)增區(qū)采取清潔臺(tái)面、通風(fēng)透氣、紫外照射等辦法進(jìn)行*地處理,一般所需時(shí)間較長(zhǎng),會(huì)對(duì)DNA鑒定工作產(chǎn)生影響。為了不影響工作,必要時(shí)可在DNA實(shí)驗(yàn)室之外的其它實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行DNA擴(kuò)增。

    當(dāng)對(duì)DNA鑒定結(jié)論產(chǎn)生懷疑時(shí),條件允許的情況下可以采用重新檢驗(yàn)的方法進(jìn)行驗(yàn)證,這是糾正DNA污染的另一方法。當(dāng)兩次檢驗(yàn)的結(jié)果相同時(shí),應(yīng)該認(rèn)為DNA結(jié)果是可靠的;當(dāng)兩次結(jié)果不同時(shí),要認(rèn)真分析原因后再考慮進(jìn)一步采取的措施。如果是同一個(gè)體來(lái)源的樣本出現(xiàn)兩次結(jié)果的不同,則肯定有錯(cuò)誤發(fā)生;如果發(fā)生在現(xiàn)場(chǎng)提取的物證檢材上,由于DNA檢驗(yàn)對(duì)檢材是消耗性的,則要分析檢材上是否存在不同來(lái)源的DNA。

    DNA污染是產(chǎn)生DNA鑒定結(jié)論錯(cuò)誤的重要因素,法醫(yī)DNA實(shí)驗(yàn)室要努力去解決這一問(wèn)題。但是,DNA污染不僅發(fā)生在DNA實(shí)驗(yàn)室的檢驗(yàn)環(huán)節(jié),還有可能發(fā)生在物證檢材的提取過(guò)程中,也有可能發(fā)生在用其它物證技術(shù)對(duì)物證檢材進(jìn)行檢驗(yàn)之時(shí)。所以,隨著法醫(yī)DNA技術(shù)的廣泛應(yīng)用,對(duì)DNA污染的防范不單是DNA檢驗(yàn)人員的職責(zé),而是所有法庭科學(xué)技術(shù)人員共同的責(zé)任,應(yīng)引起高度重視,以使現(xiàn)場(chǎng)提取到的物證檢材發(fā)揮應(yīng)有的價(jià)值。