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ADH,使用犬抗利尿激素ELISA試劑盒需要注意什么?
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被犬抗利尿激素(ADH)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,經(jīng)過(guò)溫育并洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的犬抗利尿激素(ADH)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值),計(jì)算樣品濃度。
1. 檢測(cè)范圍:1 pg/mL – 32 pg/mL。
2. 靈敏度:檢測(cè)濃度小于0.1 pg/mL。
3. 特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
重復(fù)性:板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ,板間變異系數(shù)小于15%
犬抗利尿激素(ADH)ELISA試劑盒的工作原理基于酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)技術(shù),具體流程如下:
微孔板預(yù)先包被與犬ADH結(jié)構(gòu)相似的抗原(可能為重組ADH或合成多肽)?27。該抗原通過(guò)物理吸附固定在孔板表面,保留免疫學(xué)活性?46。
?樣品/標(biāo)準(zhǔn)品處理?:待測(cè)犬樣本(如血清、血漿)中的ADH與生物素標(biāo)記的ADH類似物同時(shí)加入孔板?78。
?競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合?:樣本中的天然ADH與生物素標(biāo)記的ADH競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合孔板中有限的ADH特異性抗體結(jié)合位點(diǎn)?37。ADH濃度越高,與抗體結(jié)合的生物素標(biāo)記ADH越少,形成競(jìng)爭(zhēng)性抑制關(guān)系?38。
?去除未結(jié)合物質(zhì)?:洗滌去除未結(jié)合的游離ADH和抗體復(fù)合物?46。
?酶標(biāo)二抗結(jié)合?:加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的鏈霉親和素,與生物素標(biāo)記的ADH-抗體復(fù)合物結(jié)合?38。
?底物反應(yīng)?:加入TMB顯色底物,HRP催化底物生成藍(lán)色產(chǎn)物,反應(yīng)終止后變?yōu)辄S色?46。
?濃度計(jì)算?:通過(guò)檢測(cè)450 nm波長(zhǎng)下的吸光度值,吸光度與樣本中ADH濃度呈負(fù)相關(guān)(即ADH濃度越高,顯色越淺)?37。標(biāo)準(zhǔn)曲線法可精確計(jì)算ADH濃度?38。
?檢測(cè)范圍?:通常覆蓋pg/ml級(jí)別(如0.781-50 pg/ml),靈敏度高?37。
?特異性?:依賴抗體對(duì)ADH的特異性識(shí)別,可排除其他類似結(jié)構(gòu)干擾?27。
?應(yīng)用場(chǎng)景?:適用于犬體液樣本中ADH的定量檢測(cè),用于研究水電解質(zhì)平衡、腎功能異常等?
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