OLYMPUS熒光顯微鏡原理及使用方法

閱讀：5783發(fā)布時間：2021-8-24

　　基本原理

　　熒光：是一種非溫度輻射冷光，據(jù)發(fā)生性質(zhì)可分為光化熒光(由特定光源光譜激發(fā)而產(chǎn)生的熒光)、放射熒光(放射性物質(zhì)激發(fā))、生物熒光(生物體發(fā)出)、化學(xué)熒光(如磷氧化時)等。

　　熒光現(xiàn)象：某物質(zhì)在受到某種特定波長的高能量光(短波長)照射后獲取能量，幾乎即時(約在10～15s后)其分子內(nèi)的電子躍遷到較高能級軌道使分子進(jìn)入激發(fā)態(tài)，激發(fā)態(tài)的分子不通過內(nèi)部轉(zhuǎn)換方式消耗能量回到基態(tài)，而是釋放出相應(yīng)較低能量的光量子→人眼可見的熒光(較長波長)。

　　熒光現(xiàn)象有兩種：一次熒光現(xiàn)象，又稱“固有熒光”或“自發(fā)熒光”，是指經(jīng)照射后，就能發(fā)出熒光的物質(zhì)，此類物質(zhì)的化學(xué)特征是發(fā)光分子具有共軛雙鍵，π電子活動性大。二次熒光現(xiàn)象，又稱“繼發(fā)熒光”，物質(zhì)經(jīng)照射后不能或只能部分發(fā)生微弱的熒光，這樣就需先用熒光色素(或稱熒光染料、熒光探針)標(biāo)記處理，將熒光色素標(biāo)記結(jié)合插入到不發(fā)光的活性分子中去，再經(jīng)照射才能發(fā)生熒光。熒光色素應(yīng)具備的基本條件是能與不發(fā)光分子的某個區(qū)域有特異性的牢固結(jié)合，同時不會影響被結(jié)合分子的結(jié)構(gòu)和特性，光量子效率應(yīng)≥013。

　　熒光的產(chǎn)生包含了激發(fā)和發(fā)射兩個過程，激發(fā)光譜短于發(fā)射光譜，故光色不同。而不同的熒光物質(zhì)或熒光色素有其最敏感而有效的激發(fā)波長，因此選擇合適的激發(fā)/發(fā)射光譜以獲得最佳的熒光鏡像質(zhì)量是實驗中要首先考慮的。

　　熒光顯微鏡是利用“光化熒光”成像，如果所選激發(fā)波長在肉眼所看不見的近紫外光區(qū)(320～400nm)，熒光的發(fā)射光譜也較普通光鏡光源的平均波長短，光學(xué)分辨率提高。

　　OLYMPUS熒光顯微鏡使用方法：

　　(1)先關(guān)閉熒光通道，再打開熒光激發(fā)器電源，等待15分鐘。

　　(2)等待期間，打開顯微鏡光源，找到需要觀察的樣品，選用合適的物鏡，調(diào)整焦距。

　　(3)關(guān)閉顯微鏡光源，打開熒光通道。

　　(4)需要圖片，要把鏡體上的相應(yīng)拉桿拉到綠線位子。按下相應(yīng)附件上的照相按扭。

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