培養(yǎng)基

       基礎(chǔ)培養(yǎng)基絕大多數(shù)是建立在平衡鹽溶液（BSS）基礎(chǔ)上，添加了氨基酸、維生素和其它與血清中濃度相似的營養(yǎng)物質(zhì)。zui廣泛應(yīng)用的基礎(chǔ)培養(yǎng)基是MEM ，其中含有13種必須氨基酸、8種維生素。

    目前科研市場經(jīng)典的培養(yǎng)基有很多種，其中DMEM、RPMI 1640、MEM、DMEM/F12都是應(yīng)用zui廣泛的培養(yǎng)基。其他如M199、IMDM、L15培養(yǎng)基等也用于ATCC細胞的培養(yǎng)。

1. MEM是由基礎(chǔ)培養(yǎng)基(BME)發(fā)展而來的，其中增加了組分的范圍及濃度。

2. 改良的基礎(chǔ)培養(yǎng)基培養(yǎng)基也就是我們所說的DMEM培養(yǎng)基zui初是為小鼠成纖維細胞培養(yǎng)專門設(shè)計的，現(xiàn)在常用于貼壁細胞的培養(yǎng)。DMEM的氨基酸濃度是MEM的兩倍，維生素濃度是MEM的4倍，采用雙倍的HCO3-和CO2濃度起到更好的緩沖作用。zui初的配方中葡萄糖含量為1000 mg/L，后來為了某些細胞的生長需要，將葡萄糖含量又調(diào)整為4500 mg/L，這就是大家常說的低糖和高糖了。

3. a-MEM含有附加的氨基酸、維生素以及核苷和脂肪酸，它可廣泛應(yīng)用于各種細胞類型，包括對營養(yǎng)成分要求苛刻的細胞。

4. Ham’s F12是為在低血清濃度下克隆CHO細胞而設(shè)計的，現(xiàn)在也廣泛應(yīng)用于克隆形成率的分析及原代培養(yǎng)。F12還可以與DMEM 等體積混合使用，得到一種高濃度與成分多樣化相結(jié)合的產(chǎn)物，這種培養(yǎng)基已應(yīng)用于許多原代培養(yǎng)及更難養(yǎng)的細胞系的培養(yǎng)。

5. RPMI 1640培養(yǎng)基是專為淋巴細胞培養(yǎng)而設(shè)計的，現(xiàn)在已廣泛應(yīng)用于懸浮細胞的培養(yǎng)。

    很多新人經(jīng)常困惑ATCC細胞該用哪一種培養(yǎng)基呢?其實這個問題的答案可以很簡單，也可以好復雜。如果這種細胞是購自細胞庫，那您直接問供應(yīng)商就行了，他們會給您一個的推薦。如您不知道細胞的來源，您也可以找到相關(guān)的文獻，基本文獻中使用的培養(yǎng)基都可作為參考。但如果你是著手建立一種全新細胞的培養(yǎng)體系，根本找不到任何參考，那你就得花點時間自己試驗。在MEM中培養(yǎng)的細胞，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長。總之，MEM做貼壁細胞培養(yǎng)、RPMI 1640做懸浮細胞培養(yǎng)會是一個好的開始。同時選購幾種不同的培養(yǎng)基同時進行培養(yǎng)實驗來選擇其中的。有時候你會驚訝地發(fā)現(xiàn)你的*培養(yǎng)條件與文獻報道的不同，就算是同一種培養(yǎng)條件，細胞的生長狀態(tài)也時好時壞，這是很正常的。因為試劑、水、不同批號的血清之間都存在著差異。要提高培養(yǎng)基的穩(wěn)定性，可以從培養(yǎng)基和血清兩方面入手。

    以前大部分實驗室都是用干粉培養(yǎng)基，但干粉有很多弊端

    1. 配制過程就較為繁瑣，要溶解、調(diào)pH值，過濾，過程中可能會產(chǎn)生一些濃度誤差，

    2.有些實驗室的水質(zhì)并不理想，所以培養(yǎng)的效果會有差異。

    如果使用液體培養(yǎng)基，這種人為的誤差會減少，因為畢竟是大批量工業(yè)化的，批間差會很小。

    血清

    說到細胞培養(yǎng)，血清固然是細胞培養(yǎng)中*的成分，但血清的批間差異大，更換血清時需要做大量的測試以取保替換的血清與原來的相似。而血清的供應(yīng)也是必須要考慮的因素。由于氣候或瘋牛病等的影響，血清貨源的問題對實驗的影響可非同小可。另外，血清的價格也很昂貴，高品質(zhì)的澳洲血清價格更高。因此，也有一些實驗室開始換用無血清培養(yǎng)基。

    無血清培養(yǎng)基(Serum-Free Media)，

    通常以SFM表示，顧名思義，就是在ATCC細胞培養(yǎng)中不需要添加血清，但是在某些應(yīng)用中可能要添加生長因子或細胞因子。無血清培養(yǎng)基中添加了血清的主要成分：粘附因子、生長因子、必需的營養(yǎng)物質(zhì)和激素等，能減少上述血清帶來的不利因素，使細胞培養(yǎng)的條件更穩(wěn)定。但它也不是的，從有血清培養(yǎng)過渡到無血清培養(yǎng)的條件并不像想象中那么直截了當。處于發(fā)育的不同分化階段的細胞(例如干細胞與定向前體細胞相比)需要不同的配方，對生長因子和細胞因子的選擇尤為重要。而且在去除血清的同時，也去除了一些血清蛋白具有的保護、解毒作用，因此對試劑、水的純度和儀器清潔度的要求更高。另外，它的價格也比普通的培養(yǎng)基貴很多。