神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)需要注意的操作方法

神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)需要注意的操作方法

神經(jīng)細(xì)胞（神經(jīng)元）不易培養(yǎng)，只有在適宜情況下，如接種在膠原底層上，或加入神經(jīng)生長因子和膠質(zhì)干細(xì)胞因子時，可出現(xiàn)一定程度的分化，長出突起等現(xiàn)象，但很難使之增值。而神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞是神經(jīng)組織中比較容易培養(yǎng)的成分。 

人、鼠等腦組織即可用于神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)，不僅能獲得生長的膠質(zhì)細(xì)胞，也可形成能傳代的二倍體細(xì)胞系。一般說來，膠質(zhì)細(xì)胞在培養(yǎng)中生長不穩(wěn)定，不易自發(fā)轉(zhuǎn)化，但對外界因素仍保持很好的敏感性，可用ROUS病毒和SV4等誘發(fā)轉(zhuǎn)化。 
1、從手術(shù)室無菌取腦髓灰質(zhì)或白質(zhì)后，仔細(xì)剝除腦膜、血管和纖維成分，置hanks液中漂洗一、二次。 
2、置于30—50倍體積的hanks液中，此時腦組織比較柔軟，反復(fù)吹打即制成干細(xì)胞懸液。 
3、把懸液注入離心管室溫中直立5—10分鐘后，細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)快自然下沉，脂肪等雜物易漂浮，可吸除上層、反復(fù)二、三次，即可排除脂肪成分和其它碎塊并獲較多細(xì)胞成分。 
4、在沉降物中加入適量培養(yǎng)液，通過紗網(wǎng)成紗布過濾，計數(shù)并調(diào)整細(xì)胞密度。 
5、接入培養(yǎng)瓶或皿中，置5%CO2溫箱中培養(yǎng)。 
該細(xì)胞適應(yīng)環(huán)境過程較長，接種后貼壁較慢。貼壁后短期內(nèi)也可能不見細(xì)胞分裂現(xiàn)象，然而一旦生長后即能迅速進(jìn)入旺盛的增殖狀態(tài)。干細(xì)胞傳代可以0.25%胰酶消化處理。