ATCC細胞實驗用品

材料：貼壁培養(yǎng)的細胞

器材：24孔培養(yǎng)孔板、吸管、膠帽、離心管、培養(yǎng)皿、半對數(shù)坐標紙、蓋玻片、細胞計數(shù)板、酒精棉球、酒精燈、離心機、倒置顯微鏡、普通光學顯微鏡、超凈工作臺、CO2培養(yǎng)箱

試劑：Hanks液、DMEM培養(yǎng)基(含10％小牛血清)、0. 25％胰蛋白酶消化液、吉姆薩染液

實驗步驟

(1)消化：用0．25％胰蛋白酶溶液消化處于對數(shù)生長期的單層培養(yǎng)細胞，收集消化的細胞于10 ml離心管中。

(2)離心：500～1000r／min離心5min，棄上清。

(3)加入DMEM培養(yǎng)基(含10％小牛血清)，制備單細胞懸液。

(4)計數(shù)：吹打均勻后對細胞進行計數(shù)。

(5)按2×104～5×104個／ml的ATCC細胞密度接種在24孔培養(yǎng)孔板內(nèi)。

(6)每天用胰蛋白酶溶液對其中3孔細胞進行消化，鏡下計數(shù)。

(7)計算3孔培養(yǎng)細胞數(shù)的平均值(細胞數(shù)／ml)。

(8)連續(xù)7天按上述方法消化3孔細胞并進行計數(shù)，算平均值。

(9)以培養(yǎng)時間作為橫坐標、細胞數(shù)為縱坐標，在半對數(shù)坐標紙上，將各點連成曲線，即可獲得細胞的生長曲線(圖5-1)。

結果分析

培養(yǎng)細胞的生長曲線在正常情況下通常呈s形，觀察曲線可發(fā)現(xiàn)，培養(yǎng)初期(1～2天)的細胞數(shù)約呈下降趨勢，這段時期即為細胞滯留期(潛伏期)。滯留期之后的3～5天，細胞數(shù)增加顯著，呈對數(shù)增長的趨勢，此時細胞進入了對數(shù)生長期。當對數(shù)生長期細胞數(shù)達到高峰，細胞生長逐漸停止，細胞數(shù)量進入穩(wěn)定狀態(tài)，此時即為平臺期(平頂期)。

注意事項

在進行生長曲線的測定時，接種到培養(yǎng)板孔中的細胞數(shù)量應保持每孔一致。接種量應適當，不能過少或過多，過少將使細胞生長周期延長，過多將導致細胞在實驗未完成前即需傳代，這兩種情況下所得到的生長曲線均不能較準確地反應ATCC細胞的生長狀況。