ATCC細胞核移植技術

ATCC細胞從2-4月齡成熟母鼠獲得，未成熟支持細胞從0-5日齡未成熟雄鼠獲得。卵丘細胞通過透明質酸酶脫顆粒細胞獲得。未成熟睪支持細胞獲得方法如下：
取下的小鼠睪用0.1mg/ml膠原酶與0.01mg/ml脫氧核糖核酸酶37℃處理30min，然后用0.2mg/ml胰蛋白酶37℃處理5min，去睪懸液即可。睪懸液用含4mg/ml BSA的PBS洗一下就可用于顯微注射了。未成熟睪細胞根據其體積與形態(tài)即可確認。
MII期受體卵母ATCC細胞在37℃條件下去核，操作液為含5µg/ml CB的Hepes-KSOM。BDF1染色體在Nomarski光學鏡下能夠很容易的辨認，利用Piezo裝置將紡錘體及其周圍少量胞質取出。去核的卵母細胞在KSOM液中孵育30min-2h使其胞膜*恢復。供體細胞在室溫下、Hepes-KSOM液中利用Piezo裝置注入去核卵母細胞中。供體細胞的核沒有必要從細胞質中*弄出來，因為卵丘細胞與未成熟睪支持細胞的胞膜都是軟的，在注射時它們的胞膜很容易破。注射了體細胞的卵母細胞在KSOM中孵育1-2h使體細胞的染色質凝集。重構胚在無Ca2、含3mM SrCl2 與5µg/ml CB的KSOM液中孵育1h，然后在含5µg/ml CB的KSOM液中孵育5h，zui后移入單純的KSOM液中培養(yǎng)72h。
72h后發(fā)育到桑囊胚階段的重構胚移植入8-12周齡假孕3d的ICR雌鼠(小鼠見栓當天稱為*)子宮中。8-10枚胚胎移入一側子宮(16-20枚胚胎移入一種受體小鼠)。ATCC細胞在第20d時，檢測受體小鼠中成活的胚胎，活著的小鼠讓泌乳ICR雌鼠哺乳。
含量測定    氟比洛芬酯    對照品    100696-200401        200mg
HPLC法含量測定    鹽酸舍曲林    對照品    100702-200401        50mg
HPLC法含量測定    馬來酸依那普利    對照品    100705-200401        100mg
HPLC檢查    依那普利雙酮    對照品    100706-200401        30mg
HPLC系統(tǒng)適應性檢查    依那普利拉    對照品    100707-200401        30mg
含量測定（HPLC）    蘭索拉唑    對照品    100709-200501        100mg
ATCC細胞