貝類5羥色胺（5-HT）ELISA試劑盒操作注意事項(xiàng)

     在完成試劑配制和樣本預(yù)處理后，需特別注意以下操作細(xì)節(jié)以確保檢測(cè)準(zhǔn)確性：

1. 加樣標(biāo)準(zhǔn)化

使用多通道移液器時(shí)，建議提前校準(zhǔn)移液頭精度，每孔加樣量誤差需控制在±2%以內(nèi)。對(duì)于高黏度貝類組織勻漿，建議采用反向吸液法，并在加樣前用預(yù)冷PBS潤洗槍頭3次，避免樣本掛壁導(dǎo)致的體積偏差。

2. 溫育環(huán)境控制

37℃孵育階段應(yīng)使用具有主動(dòng)循環(huán)功能的恒溫箱，并在反應(yīng)板表面覆蓋密封膜時(shí)預(yù)留5mm透氣邊縫，防止冷凝水積聚。每30分鐘人工搖板1次（振幅10cm，頻率60次/分鐘），可顯著提高抗原抗體結(jié)合效率。

3. 洗板關(guān)鍵參數(shù)

自動(dòng)洗板機(jī)建議設(shè)置"預(yù)洗-浸泡-終洗"三步程序：預(yù)洗液量300μL/孔（流速1mL/s），Tris緩沖液浸泡60秒，終洗采用脈沖式?jīng)_洗（5次×200μL/次）。手工洗板時(shí)需保持洗液注滿板孔后靜置90秒，棄液時(shí)板體傾斜45°角輕叩10次。

?4. 顯色終止時(shí)機(jī)

當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品最高濃度孔OD值達(dá)到0.8-1.2時(shí)（波長450nm），應(yīng)立即終止反應(yīng)。對(duì)于富含黑色素的貽貝樣本，建議在終止后30分鐘內(nèi)完成讀數(shù)，并使用620nm參比波長校正濁度干擾。

5. 數(shù)據(jù)質(zhì)控要點(diǎn)

每批次應(yīng)包含3個(gè)質(zhì)控樣本：空白對(duì)照（零標(biāo)準(zhǔn)品）、基質(zhì)加標(biāo)回收樣（80-120%回收率）、重復(fù)樣（CV值<8%）。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)曲線R2值<0.99時(shí)，需復(fù)核標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋步驟是否出現(xiàn)跳管污染。

特殊情況下（如檢測(cè)扇貝生殖腺樣本），可適當(dāng)調(diào)整樣本稀釋倍數(shù)至1:5，并延長封閉時(shí)間至45分鐘。所有操作需在避光環(huán)境下完成，避免5-HT光降解。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，剩余96孔板條應(yīng)立即裝入含干燥劑的鋁箔袋，4℃保存不超過72小時(shí)。