細(xì)胞活體染色的原理和技術(shù)

細(xì)胞活體染色的原理和技術(shù)  

實(shí)驗(yàn)原理 

活體染色是指對(duì)生命有機(jī)體的細(xì)胞或者組織能著色，但又無(wú)毒害的一種染色方法。目的在于顯示生活細(xì)胞內(nèi)的某些天然結(jié)構(gòu)，同時(shí)不會(huì)影響細(xì)胞的正常生命活動(dòng)和引起細(xì)胞死亡。活體染色技術(shù)可以用來(lái)研究生活狀態(tài)下的細(xì)胞結(jié)構(gòu)和生理、病理狀態(tài)變化。液泡是細(xì)胞內(nèi)濃縮產(chǎn)物的主要場(chǎng)所，具有重要的功能。中性紅（neutral red）是液泡的特殊染色劑，只將液泡染成紅色。對(duì)于活細(xì)胞，細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核不會(huì)被染色。 
實(shí)驗(yàn)儀器、材料和試劑 

1）儀器和用具：顯微鏡、鑷子、小燒杯、吸水紙、載玻片、蓋玻片 
2）材料：洋蔥鱗莖 
3）試劑 
① Ringer溶液：NaCl 8.5g、CaCl2 0.12g、NaHCO3 0.20g、KCl 0.14g、Na2HPO4 0.01g、葡萄糖 2.0g，加蒸餾水至1000mL。 
② 1％和1/3000中性紅溶液：稱取0.5g中性紅溶于50mL Ringer溶液，稍加熱使之很快溶解，用濾紙過(guò)濾，裝入棕色瓶暗處保存，防止氧化沉淀失去染色能力。臨用前取1％中性紅溶液1mL，加入29mL Ringer溶液混勻，裝入棕色瓶備用。 
③ 0.85％的生理鹽水。 
④ 聯(lián)苯胺溶液：在0.85％的鹽水中加入聯(lián)苯胺至飽和為止，臨用前加入20％H2O2，1滴/2mL。 
⑤鉬酸銨溶液：稱取0.1g鉬酸銨溶于100mL 0.85%生理鹽水。 
實(shí)驗(yàn)步驟 
1.植物細(xì)胞液泡的活體染色 
洋蔥內(nèi)表皮：撕取洋蔥鱗莖內(nèi)表皮，放在加有一滴1/3000的中性紅染液的載波片上，染色10min，用吸水紙吸去中性紅染液，換上蒸餾水，蓋上蓋玻片，顯微鏡觀察，可見(jiàn)到被染成磚紅色的中央大液泡。 
黃豆根尖： 
1）取一干凈載玻片，滴一滴1/3000中性紅染液； 
2）用刀片將初生的黃豆根尖（約1－2cm長(zhǎng)）切一縱薄片，置染液中，染8分鐘； 
3）用吸管吸蒸餾水滴在染液周圍，使染液沖淡，吸去再換水使染液近無(wú)色； 
4）用蓋玻片蓋在樣品上，吸去多余水分； 
5）觀察：在高倍鏡下，先觀察分生區(qū)細(xì)胞，尋找染成紅色的圓形液泡，這是初生的幼小液泡；由分生區(qū)向伸長(zhǎng)區(qū)觀察，在長(zhǎng)方形細(xì)胞中尋找染色較淺，體積增大的液泡；在根毛區(qū)尋找體積更大的液泡，有的占據(jù)胞質(zhì)大部分，將細(xì)胞核擠至一側(cè)。