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ATCC細(xì)胞購買后的操作準(zhǔn)則

時間:2017-8-14閱讀:387
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如果ATCC細(xì)胞是單層貼壁生長:

1.無菌操作,取出大約5至10ml的運(yùn)輸培養(yǎng)基。運(yùn)輸培養(yǎng)基可以保存在4℃?zhèn)溆谩?/p>

2.將培養(yǎng)瓶放在產(chǎn)品說明書中推薦的溫度和CO2濃度下培養(yǎng)(大多數(shù)細(xì)胞系為37℃與5%CO2)直到細(xì)胞可以傳代培養(yǎng)。

如果ATCC細(xì)胞不貼壁或是懸浮狀態(tài)生長:

1.在無菌條件下,將培養(yǎng)瓶的全部內(nèi)容物轉(zhuǎn)移到離心管中。

2.在125×g轉(zhuǎn)速下離心5~10 min。

3.取出大約10 ml運(yùn)輸培養(yǎng)基的上清液,并重懸細(xì)胞。將取出的運(yùn)輸培養(yǎng)基儲存在4℃?zhèn)溆谩?/p>

4.無菌條件下,轉(zhuǎn)移懸浮細(xì)胞到25 cm2或75 cm2的培養(yǎng)瓶中,培養(yǎng)瓶大小取決于細(xì)胞株(見產(chǎn)品說明書)。

5.按照產(chǎn)品說明書中推薦的溫度和CO2濃度培養(yǎng)細(xì)胞,直到細(xì)胞可以傳代培養(yǎng)。原代細(xì)胞來源于一塊碎的或酶消化的組織。原代培養(yǎng)物,是多種類型細(xì)胞的混合物,保留了其來源組織的特點(diǎn)。

一段時間后,原代培養(yǎng)的細(xì)胞會達(dá)到融合狀態(tài),即在培養(yǎng)瓶中的所有可用空間由于細(xì)胞擴(kuò)增都被覆蓋。在此之后,細(xì)胞需要消化(通常用蛋白水解酶,如胰蛋白酶)為單個細(xì)胞并且傳代(分裂,傳代或轉(zhuǎn)移)。在*次傳代以后,培養(yǎng)物通常被稱為一個細(xì)胞系。

每一次傳代培養(yǎng),細(xì)胞群體由于快速生長的細(xì)胞占主導(dǎo)地位而變得更均勻。具有所需特性的細(xì)胞也可以通過克隆,從培養(yǎng)物中選出。二倍體細(xì)胞很少可以倍增超過幾代。它們只有有限的復(fù)制能力,并且在細(xì)胞倍增20至80次后開始減緩并zui終停止分裂。

zui近的證據(jù)表明,某些細(xì)胞中觀察到的ATCC細(xì)胞衰老與預(yù)計的復(fù)制性衰老不同,可能是由于不適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)條件導(dǎo)致的。還有其他數(shù)據(jù)顯示,對某些物種的細(xì)胞系(尤其是人源的)即使生長在改進(jìn)的培養(yǎng)條件下仍存在復(fù)制衰老。這種衰老是由細(xì)胞分裂時染色體末端(端粒)縮短調(diào)控的。
常溫,避光    含量測定    *:    雙香豆素    規(guī)格:    100mg
常溫,避光    TLC法檢查用    *:    雙氰胺    規(guī)格:    50mg
常溫,避光    含量測定    *:    水楊酸鎂    規(guī)格:    50mg
常溫,避光    含量測定    *:    司坦唑醇    規(guī)格:     100mg 
常溫,避光    含量測定    *:    苯妥英鈉    規(guī)格:    50mg
ATCC細(xì)胞

 

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