Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人乳腺癌細(xì)胞；231-Cas9-550說(shuō)明書

Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人乳腺癌細(xì)胞；231-Cas9-550說(shuō)明書采用干冰保存運(yùn)輸。收到細(xì)胞時(shí)，若干冰已經(jīng)*融化，請(qǐng)立即將細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng)；若尚留有干冰，請(qǐng)立即將細(xì)胞放入液氮中保存待用，請(qǐng)按條件貯存細(xì)胞，切不可將細(xì)胞置于高溫環(huán)境。

Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人乳腺癌細(xì)胞；231-Cas9-550說(shuō)明書現(xiàn)貨直銷，免費(fèi)快遞送貨上門。公司供應(yīng)各種細(xì)胞株，細(xì)胞系，種類齊全，現(xiàn)貨，質(zhì)量保證，公司所有產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于醫(yī)學(xué)診斷。使用前仔細(xì)閱讀本說(shuō)明書。

產(chǎn)品名稱	Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人乳腺癌細(xì)胞；231-Cas9-550說(shuō)明書
用途	僅用科研
保存條件	4℃保存一年;-20℃長(zhǎng)期保存

細(xì)胞名稱
形態(tài)特性  上皮樣
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性  該細(xì)胞是采用慢病毒感染的方式使MDA-MB-231細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)Cas9-Flag-Puromycin，經(jīng)2ug/ml嘌呤霉素篩選得到的單克隆，經(jīng)Western Blotting驗(yàn)證該克隆可以表達(dá)Cas9蛋白，可直接用Crispr技術(shù)編輯基因組DNA。 
培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS；2ug/ml Puromycin
傳代方法  1:2~1:4傳代；每周2~3次。
傳代情況 C3
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 培養(yǎng)法（-）
STR  Amelogenin：x,x；CSF1PO：12,13；D12S391：17,18；D13S317：13,13；D16S539：12,12；D18S51：11,16；D19S433：11,14；D21S11：30,33.2；D2S1338：20,21；D3S1358：16,16；D5S818：12,12；D6S1043：18,18；D7S820：8,9；D8S1179：13,13；FGA：22,23；Penta E：11,11；TH01：7,9.3；TPOX：8,9；vWA：15,18；
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 A類
運(yùn)輸保存：
采用干冰保存運(yùn)輸。收到細(xì)胞時(shí)，若干冰已經(jīng)*融化，請(qǐng)立即將細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng)；若尚留有干冰，請(qǐng)立即將細(xì)胞放入液氮中保存待用，請(qǐng)按條件貯存細(xì)胞，切不可將細(xì)胞置于高溫環(huán)境。
保存條件：4℃保存一年;-20℃長(zhǎng)期保存
用途：只可用于科研。
儲(chǔ)存：液氮。
運(yùn)輸：干冰(第二代培養(yǎng)末期液氮凍存)。
細(xì)胞一般2-3天更換一次培養(yǎng)基，這取決于細(xì)胞生長(zhǎng)的速度。許多細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。
注意：*次植入后，在6-16小時(shí)內(nèi)更換培養(yǎng)基，以去除殘留的二甲基亞楓和死亡細(xì)胞。到達(dá)客戶手中，出現(xiàn)任何問(wèn)題（人為或者非人為），導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。對(duì)于細(xì)胞的真實(shí)性，支持客戶檢測(cè)對(duì)應(yīng)的biomarker，（如證明細(xì)胞錯(cuò)誤，全額退款。）公司針對(duì)每株細(xì)胞，鑒定gene background，鑒定完成的細(xì)胞可以提供數(shù)據(jù)，用于證明細(xì)胞的真實(shí)性，并且?guī)椭蛻舾嗟牧私饧?xì)胞特性。
操作步驟：
1. 將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)品，2mg/mL1mL
Calcein M 100mg
非凍型血液 DNA 保存液250mL
Protein G 瓊脂糖1mL
120505-500Dam 甲基轉(zhuǎn)移酶500U
130997-10Sephadex G50 介質(zhì)10mL
TCEP 鹽酸膦1g
電泳 TEMED1.5mL
TBE 電泳液 ,10×250mL
DNA 修復(fù)混合液 30 次
131090-10中性親和素蛋白10mg
130605-50即用型多重 PCR 試劑盒50 次
脫氧核糖核酸酶 ( 牛胰 )25mg
放線酮溶液 ,100mg/mL1mL
甲叉雙丙烯酰胺25g
M13mp18DNA10μg
CAS11096-37-0apo- 轉(zhuǎn)鐵蛋白10mg
120515-20即用型藍(lán)白 T 載體 E 型 ( 無(wú)啟動(dòng)子，無(wú) MCS)20 次
嘌呤5g
固藍(lán) RR 鹽5g
金胺 O5gDL-TryptophanDL-色氨酸1954/12/6
NAPHTHENIC ACID SODIUM SALT環(huán)烷酸61790-13-4
DL-3-AMINOBUTYRIC ACIDDL-3-氨基丁酸541-48-0
Standard solution for the verification of ICP-OESICP光譜儀檢定溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)
Allopurinol別嘌醇315-30-0
2-Aminobenzotrifluoride2-氨基三88-17-5
L-Epinephrine hydrochloride酸腎上腺素55-31-2
Disodium phosphate dodecahydrate磷酸氫二,十二水10039-32-4
2,6-DIBROMOBENZALDEHYDE2,6-二溴67713-23-9
1-Cyclohexene-1-carboxylic acid環(huán)己酸636-82-8
2-Ethylhexylamine2-乙基己胺104-75-6
Nitroate cellulose sheets酸纖維素薄膜
N-Benzyl-4-piperidoneN-芐基啶3612-20-2
N-NITROSOMORPHOLINEN-亞基啉59-89-2
Stearic acid硬脂酸1957/11/4
5-Fluoroindole5-吲哚399-52-0
(TRIISOPROPYLSILYL)ACETYLENE三異丙基硅基乙炔89343-06-6
1,2,4-Triazolo[4,3-a]pyridin-3(2H)-one吡啶三唑6969-71-7
Methyl L-prolinate hydrochlorideL-脯氨酸酯酸2133-40-6
Cyclobutanol環(huán)丁醇2919-23-5
2-Methoxy-4-nitroaniline2-氧基-4-基胺97-52-9
P-AMINOBENZAMIDE GLYCINE對(duì)氨基酰甘氨酸
MANGANESE(II) ACETYLACETONATE乙酰丙錳(II)14024-58-9