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SV40轉(zhuǎn)化的非洲綠猴腎細(xì)胞；COS-1說明書【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細(xì)胞名稱SV40轉(zhuǎn)化的非洲綠猴腎細(xì)胞；COS-1說明書
形態(tài)特性  成纖維細(xì)胞樣
生長特性 貼壁生長
特征特性  該細(xì)胞源自CV-1細(xì)胞株，經(jīng)轉(zhuǎn)染編碼野生型T抗原、起始點(diǎn)缺陷突變的SV40得到；細(xì)胞中整合有SV40基因組完整早期區(qū)段的單個(gè)拷貝。該細(xì)胞表達(dá)T抗原，適用于需要SV40T抗原表達(dá)的載體的轉(zhuǎn)染；保留SV40溶細(xì)胞性生長的特性；支持40℃時(shí)溫度敏感性A209病毒的復(fù)制；支持早期區(qū)段缺失的SV40純體的復(fù)制。因含有SV40的DNA序列，該細(xì)胞需要在2級生物安全柜中操作。 
培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  15%NBS
傳代方法  1：3傳代；3-4天一次
傳代情況 PN2
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 熒光法（-）
STR  -
同工酶 
染色體  99-110
使用權(quán)限 A類

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。   細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ?，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

苜蓿中華根瘤菌 Sinorhizobium meliloti
人絨毛膜間充質(zhì)基質(zhì)細(xì)胞
大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs） Rattus
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
側(cè)孢芽胞桿菌 Bacillus laterosporus
小鼠晶狀體上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
瓦克青霉 Penicillium waksmanii
香菇 Lentinula edodes
BGC823(人胃細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
都柏林沙門氏菌 Salmonella dublin
根瘤菌 Rhizobium sp.
SP2∕0全細(xì)胞裂解液100μg100μg
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
香菇 Lentinula edodes
人退行性細(xì)胞英文名稱：Calu-6
T24, 人膀胱細(xì)胞 Human
異常漢遜酵母異常變種 Hansenula anomala var. anomala
大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum4-Chloropyridinium chloride    4-吡啶酸    7379-35-3
N-(3-CHLOROPROPYL)PIPERIDINE HYDROCHLORIDE    N-(3-丙基)啶酸    5472-49-1
2,6-Pyridinedicarboxylic acid    2,6-吡啶二酸    499-83-2
TRIDECANOYL CHLORIDE    十三?；?nbsp;   17746-06-4
VEGETABLE STEROL    植物固醇    
4-Methylbenzophenone    4-基二    134-84-9
Methyl L-argininate dihydrochloride    L-精氨酸酯二酸    26340-89-6
PICEATANNOL    白皮杉醇    10083-24-6
9-Fluorenylmethyl chloroformate    芴氧羰酰    28920-43-6
NA    丁香蘿勒油    
4-ACETYL-4'-BROMOBIPHENYL    4-乙酰基-4-溴代聯(lián)    5731/1/1
L-Fmoc-Aspartic acid alpha-tert-butyl ester    芴氧羰基-L-天冬氨酸-1-叔丁酯    129460-09-9
2-Hydroxybenzyl alcohol    水楊醇    1990/1/7
Phthalhydrazide    鄰二酰肼    1445-69-8
1-(3-HYDROXYPROPYL)-2-PYRROLIDONE    N-羥丙基-2-吡咯烷    62012-15-1
[4-(1H-Imidazol-1-yl)phenyl]methanol    4-(1H-咪唑-1-基)醇    86718-08-3
N-Boc-N'-(2-chlorobenzyloxycarbonyl)-L-lysine    N-叔丁氧羰基-N'-(2-芐氧羰基)-L-賴氨酸    54613-99-9
Glutaric acid dimethyl ester    二酸二酯    1119-40-0
Diphenylcarbamyl chloride    二氨基酰    1983/1/2
Sodium 2-propylpentanoate    丙酸    1069-66-5
Eupalinolide B    野馬追內(nèi)酯B    877822-40-7
CYCLURON    環(huán)莠隆    2163-69-1
AMMONIUM TUNGSTATE 99.99%    鎢酸銨    11140-77-5