詳細介紹
細胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,根據(jù)要求可始終保持細胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標記等各種儀器設(shè)備。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1052 |
名稱 大鼠小梁網(wǎng)細胞
2.組織來源:眼球
3.產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
4.細胞簡介:
大鼠小梁網(wǎng)細胞分離自眼球組織;小梁網(wǎng)由角膜基質(zhì)纖維、后界膜和角膜內(nèi)皮向后擴展而成,覆蓋在鞏膜靜脈竇的內(nèi)側(cè)。小梁網(wǎng)細胞在眼內(nèi)壓調(diào)節(jié)中起著關(guān)鍵作用;小梁網(wǎng)細胞內(nèi)有特定的神經(jīng)遞質(zhì)和神經(jīng)肽受體,其中包括腎上腺素、乙酰和神經(jīng)肽Y。青光眼是由于眼內(nèi)壓力升高而造成的一種不可逆致盲眼病,小梁網(wǎng)細胞的體外培養(yǎng)是青光眼病因?qū)W研究的重要手段之一。在小梁網(wǎng)細胞中,一長串的血管活性多肽和生長因子能夠觸發(fā)細胞內(nèi)信號傳導(dǎo)機制,小梁網(wǎng)細胞可合成不同類型的細胞外基質(zhì)蛋白以及金屬蛋白酶。形態(tài)學(xué)觀察可見,剛從組織塊長出的原代細胞,形態(tài)各異,多數(shù)呈星狀或不規(guī)則形。細胞有胞突,核橢圓形,胞體肥大,胞漿豐富,且可見吞噬顆粒。隨著細胞的增生及相互融合為單層,細胞的形態(tài)趨于一致。胞漿的色素顆粒及胞突消失,排列緊密呈類似上皮細胞的扁橢圓形或不規(guī)則形。胞體透亮,包膜清晰。
5.方法簡介:
公司實驗室分離的大鼠小梁網(wǎng)細胞采用組織貼塊法制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
6.質(zhì)量檢測:
公司實驗室分離的大鼠小梁網(wǎng)細胞經(jīng)NSE(神經(jīng)元特異性烯醇化酶)免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
7.培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 梭形、多角形
傳代特性 可傳1-2代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
使用方法:
收到細胞后,請按照以下方法進行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶,75%酒精消毒,拆下封口膜,放入37℃,5% CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜,以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養(yǎng)。
3. 細胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細胞一次;
2) 添加0.125%消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中,37℃溫浴3min左右;倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后吸棄消化液,再加入*培養(yǎng)液終止消化;
3) 用吸管輕輕吹打混勻,按1:2或1:3等適當?shù)谋壤M行接種傳代,然后補充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL,放入37℃,5% CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
4) 待細胞*貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
洛格酵母 構(gòu)巢裸胞殼
平沙綠僵菌 植物乳桿菌
鼠傷寒沙門菌凍干粉 蘇云金芽孢桿菌戈爾斯德變種
粘質(zhì)亞種 開菲爾乳桿菌
球孢鏈霉菌 Streptomyces globisporus 裂褶菌
大鼠D(VD)elisa檢測試劑盒
大鼠C(VC)elisa檢測試劑盒
大鼠B6(VB6)elisa檢測試劑盒
大鼠B12(VB12)elisa檢測試劑盒
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