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詳細(xì)介紹
下列是產(chǎn)品的訂購(gòu)信息!產(chǎn)品僅用于科研
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 貨號(hào) |
BloodTaq DNA Polymerase | 2500U | GOY-F10308 |
產(chǎn)品詳細(xì)介紹：
本品是通過(guò)缺失Taq DNA Polymerase N端一段氨基酸和突變改造得到的新型DNA聚合酶。通過(guò)改造后使本產(chǎn)品能夠全血中存在的抑制劑產(chǎn)生耐受作用，能夠直接擴(kuò)增人和小鼠全血樣品中的DNA而無(wú)需事先對(duì)基因組進(jìn)行提取和純化。PCR產(chǎn)物3’端為A，可直接用于T/A克隆。 注意： a.PCR儀于94-95℃預(yù)熱，將樣品放置于PCR儀上開始循環(huán)。 b.BloodTaq提高了冷敏感性，具備了一些熱啟動(dòng)特性。通?？梢酝ㄟ^(guò)在冰上配制反應(yīng)成分、后加入聚合酶以及將熱循環(huán)儀預(yù)熱至變性溫度(95℃)后立即進(jìn)行反應(yīng)來(lái)避免非特異性產(chǎn)物的產(chǎn)生。 c.變性溫度與時(shí)間：在PCR循環(huán)前為了充分裂解血液細(xì)胞和釋放/變性DNA，要求初始變性為95℃ 5分鐘。 d.退火溫度與時(shí)間:退火時(shí)間通常為30秒-1分鐘。退火溫度可以低于理論退火溫度(Tm)5℃開始，通過(guò)梯度PCR進(jìn)行優(yōu)化。 e.延伸時(shí)間：延伸反應(yīng)通常在72℃下進(jìn)行。一般每250-500 bp延伸時(shí)間為1分鐘。推薦72℃ 10分鐘進(jìn)行終延伸。 f.通常35-40個(gè)循環(huán)可以達(dá)到優(yōu)擴(kuò)增。 5、結(jié)果檢測(cè)：反應(yīng)結(jié)束后取5μl反應(yīng)產(chǎn)物并加上電泳緩沖液一起電泳檢測(cè)結(jié)果。 儲(chǔ)存條件：-20℃，避免反復(fù)凍融。 |
DNA提取流程圖：
實(shí)驗(yàn)步驟
(1)實(shí)驗(yàn)開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說(shuō)了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過(guò)夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊(25:24:1)抽提兩次,:異戊(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無(wú)水乙,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)掃描檢測(cè)RNA的質(zhì)量
(在抽提過(guò)程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過(guò)TRIzol體積10℅。
b.單層培養(yǎng)細(xì)胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細(xì)胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定，不取決于細(xì)胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。
c．細(xì)胞懸液 離心收集細(xì)胞，每5-10×106動(dòng)物、植物、酵母細(xì)胞或1×107細(xì)菌細(xì)胞加入1ml TRIzol，反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細(xì)胞以免mRNA降解。一些酵母和細(xì)菌細(xì)胞需用勻漿儀處理。
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復(fù)合物*分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質(zhì)，脂肪，多糖或胞外物質(zhì)（肌肉，植物結(jié)節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細(xì)胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時(shí)，上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進(jìn)行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機(jī)相，上層為無(wú)色水相和一個(gè)中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中，如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機(jī)相，進(jìn)一步操作見(jiàn)后。用異丙沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。
可溶性細(xì)胞表面分化抗原40配體 英文名稱： Soluble Cluster of differeiation aigen 40 ligand 規(guī)格： 48T/96T 英文縮寫： sCD40L Dihydrosenkyunolide C 195142-72-4 中文名：二氫洋川芎內(nèi)酯C 分子式：C12H14O3
可溶性髓系細(xì)胞觸發(fā)受體-1 英文名稱： soluble iggering receptor expressed on myeloid cells-1 規(guī)格： 48T/96T 英文縮寫： sEM-1 Pazufloxacin mesilate 中文名：甲磺酸帕珠 分子式：C17H19FN2O7S
可溶性白細(xì)胞抗原G 英文名稱： soluble leukocyte aigen G 規(guī)格： 48T/96T 英文縮寫： sHLA-G Norethindrone 中文名：炔諾酮 分子式：C20H26O2
可溶性白細(xì)胞抗原 G5(sHLA-G5) 作用： ELISA 規(guī)格： 48T/96T 進(jìn)口分裝 Norfloxacin 70458-96-7 中文名： 分子式：C16H18FN3O3 度：98.0% 關(guān)鍵詞：
可溶性白細(xì)胞抗原 G(sHLA-G) 作用： ELISA 規(guī)格： 48T/96T 進(jìn)口分裝 Norfloxacin 中文名： 分子式：C16H18FN3O3
S-2-羥基戊二酸 (2S)-2-Hydroxyglutaric Acid 質(zhì)量規(guī)格：美國(guó),95% 人酪羥化酶(TH)ELISA檢測(cè)試劑盒Humayrosinehydroxylase,THELISAKit 96T/48T
3-去氮腺嘌呤 3-Deazaneplanocin A HCl salt 質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)，97% 大鼠細(xì)胞膜鈣轉(zhuǎn)運(yùn)ATP酶1(ATP2B1)試劑盒 Rat Plasma membrane calcium-anspoing ATPase 1,ATP2B1 ELISA kit
4-氧代維甲酰酚胺 3-Keto Fenretinide 質(zhì)量規(guī)格：美國(guó) 英文名稱RatCardiolipinIgG(ACAIgG)ELISAKit大鼠心0脂抗體CardiolipinIgG(ACAIgG)規(guī)格：96T/48T
4-表米諾環(huán)素 4-Epi Minocycline 質(zhì)量規(guī)格：美國(guó) 果蠅直接法PCR擴(kuò)增試劑盒50
牛磺脫氧膽酸鈉 Taurodeoxycholic acid salt 質(zhì)量規(guī)格：>97%,BR ELISAKitGP-Ⅳ人血小板膜糖蛋白Ⅳ規(guī)格：48T/96T
四環(huán)素(國(guó)產(chǎn)) Tetracycline 質(zhì)量規(guī)格：BR,國(guó)產(chǎn) 小鼠肌球蛋白重鏈4(MYH4)ELISA試劑盒 ，英文名： MYH4 ELISA Kit
乙基氫化銅蛋白,鹽酸奧普托欣 Ethylhydrocupreine HCl,Optochin HCl 質(zhì)量規(guī)格：>97%,美國(guó)進(jìn)口 人葡萄糖氧化酶(GOD)ELISA檢測(cè)試劑盒Humanglucoseoxidase,GODELISAKit 96T/48T
莫西菌素,莫西克汀 Moxidectin 質(zhì)量規(guī)格：>90%,BR 大鼠細(xì)胞角蛋白18-M65(CK 18-M65)試劑盒 Rat cytokeratin 18-M65,CK 18-M65 ELISA kit
莫西菌素,莫西克汀(標(biāo)準(zhǔn)品) Moxidectin 質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定,標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱RatCardiolipinIgA(ACAIgA))Elisakit大鼠心0脂抗體CardiolipinIgA(ACAIgA)規(guī)格：96T/48T
氨力農(nóng) Amrinone 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 過(guò)氧化氫處理DNA損傷彗星熒光檢測(cè)試劑盒20
全血Taq DNA聚合酶體液?jiǎn)伟费趸?/span>B型（MAO－B）活性化學(xué)發(fā)光法定量檢測(cè)試劑盒
組織單胺氧化酶B型（MAO－B）活性化學(xué)發(fā)光法定量檢測(cè)試劑盒
細(xì)胞單胺氧化酶B型（MAO－B）活性化學(xué)發(fā)光法定量檢測(cè)試劑盒
體液?jiǎn)伟费趸?/span>A型（MAO－A）活性化學(xué)發(fā)光法定量檢測(cè)試劑盒
組織單胺氧化酶A型（MAO－A）活性化學(xué)發(fā)光法定量檢測(cè)試劑盒
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