植物細(xì)胞質(zhì)壁分離技術(shù)分析

(1)原代細(xì)胞質(zhì)壁分離法：成長的植物細(xì)胞一般具有中央液泡，在中央液泡和細(xì)胞壁之間為細(xì)胞質(zhì)的薄層及其內(nèi)外膜——液泡膜和質(zhì)膜。液泡中的胞液具有一定的溶質(zhì)勢(或稱滲透勢)，而活的原生質(zhì)特別是液泡膜和質(zhì)膜則具有半透性。所以，當(dāng)細(xì)胞與外界溶液接觸時，便與外液構(gòu)成滲透系統(tǒng)，并可能發(fā)生水分的移動。若外液的水勢低于胞液的溶質(zhì)勢，則水分外滲的結(jié)果可使原生質(zhì)隨著液泡一起收縮而脫離細(xì)胞壁，發(fā)生質(zhì)壁分離，質(zhì)壁分離的細(xì)胞與水或水勢較高的溶液接觸時，可重新吸水而是質(zhì)壁分離復(fù)原。

原代細(xì)胞實驗步驟

1、 試劑的配置：

① 臺盼藍(lán)：4%臺盼藍(lán)母液：稱取4g臺盼藍(lán)，加少量蒸餾水研磨，加雙蒸水至100ml，用濾紙過濾，4度保存。使用時。用PBS稀釋至0.4%。

② 中性紅：先配成1%中性紅水溶液(1克中性紅溶于100毫升蒸餾水中)。取這種溶液1毫升，用0.6%生理鹽水(或蒸餾水)稀釋到50毫升，即成0.02%中性紅水溶液，貯存在棕色瓶里，放在黑暗處。

③ 美藍(lán)：取0.5克美藍(lán)，溶于30毫升95%酒精中，加100毫升0.01%氫氧化鉀溶液，保存在棕色瓶內(nèi)。此溶液能染細(xì)胞核，還用來染細(xì)菌、血和神經(jīng)組織等。

④ 甲基藍(lán)：取1克甲基藍(lán)，溶于29毫升70%酒精中，加入70毫升蒸餾水，即成1%甲基藍(lán)染液。

2、 染色操作步驟：略

3、 細(xì)胞活力測定：染色過的細(xì)胞材料，放在顯微鏡下觀察。凡未染或染色及淺的細(xì)胞是有活力的，而染色深的細(xì)胞是無活力的死細(xì)胞。

4、 按公式計算出細(xì)胞活力。 細(xì)胞活力(%)=未染色的細(xì)胞數(shù)/觀察的細(xì)胞總數(shù) X 100%

原代細(xì)胞注意事項

1. 臺盼藍(lán)對人體有毒

2. 對細(xì)胞進(jìn)行染色時，時間不宜過長。否則，部分活細(xì)胞也會著色，會干擾計數(shù)。