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(1)原代細(xì)胞質(zhì)壁分離法:成長的植物細(xì)胞一般具有中央液泡,在中央液泡和細(xì)胞壁之間為細(xì)胞質(zhì)的薄層及其內(nèi)外膜——液泡膜和質(zhì)膜。液泡中的胞液具有一定的溶質(zhì)勢(或稱滲透勢),而活的原生質(zhì)特別是液泡膜和質(zhì)膜則具有半透性。所以,當(dāng)細(xì)胞與外界溶液接觸時,便與外液構(gòu)成滲透系統(tǒng),并可能發(fā)生水分的移動。若外液的水勢低于胞液的溶質(zhì)勢,則水分外滲的結(jié)果可使原生質(zhì)隨著液泡一起收縮而脫離細(xì)胞壁,發(fā)生質(zhì)壁分離,質(zhì)壁分離的細(xì)胞與水或水勢較高的溶液接觸時,可重新吸水而是質(zhì)壁分離復(fù)原。
原代細(xì)胞實驗步驟
1、 試劑的配置:
① 臺盼藍(lán):4%臺盼藍(lán)母液:稱取4g臺盼藍(lán),加少量蒸餾水研磨,加雙蒸水至100ml,用濾紙過濾,4度保存。使用時。用PBS稀釋至0.4%。
② 中性紅:先配成1%中性紅水溶液(1克中性紅溶于100毫升蒸餾水中)。取這種溶液1毫升,用0.6%生理鹽水(或蒸餾水)稀釋到50毫升,即成0.02%中性紅水溶液,貯存在棕色瓶里,放在黑暗處。
③ 美藍(lán):取0.5克美藍(lán),溶于30毫升95%酒精中,加100毫升0.01%氫氧化鉀溶液,保存在棕色瓶內(nèi)。此溶液能染細(xì)胞核,還用來染細(xì)菌、血和神經(jīng)組織等。
④ 甲基藍(lán):取1克甲基藍(lán),溶于29毫升70%酒精中,加入70毫升蒸餾水,即成1%甲基藍(lán)染液。
2、 染色操作步驟:略
3、 細(xì)胞活力測定:染色過的細(xì)胞材料,放在顯微鏡下觀察。凡未染或染色及淺的細(xì)胞是有活力的,而染色深的細(xì)胞是無活力的死細(xì)胞。
4、 按公式計算出細(xì)胞活力。 細(xì)胞活力(%)=未染色的細(xì)胞數(shù)/觀察的細(xì)胞總數(shù) X 100%
原代細(xì)胞注意事項
1. 臺盼藍(lán)對人體有毒
2. 對細(xì)胞進(jìn)行染色時,時間不宜過長。否則,部分活細(xì)胞也會著色,會干擾計數(shù)。
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