腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)染要素

腫瘤細(xì)胞使用瞬時轉(zhuǎn)染來蛋白瞬時轉(zhuǎn)染表達(dá)蛋白  以往為了獲得蛋白質(zhì)的高表達(dá)產(chǎn)量，必須先轉(zhuǎn)染細(xì)胞，然后挑選一個穩(wěn)定的轉(zhuǎn)染細(xì)胞系進(jìn)行蛋白的擴(kuò)增和富集。而挑選這樣一個細(xì)胞系往往需要花費(fèi)數(shù)周甚至數(shù)月的時間，這既可能是由于試劑的細(xì)胞毒性也可能是由于轉(zhuǎn)染的低效率。如果是因為轉(zhuǎn)染試劑具有細(xì)胞毒性，那么只有少數(shù)細(xì)胞能夠存活，從而導(dǎo)致蛋白質(zhì)的產(chǎn)量很低。而如果是因為轉(zhuǎn)染成功的細(xì)胞太少，那么那些未轉(zhuǎn)染的細(xì)胞生長速度大大超過轉(zhuǎn)染成功的細(xì)胞，其結(jié)果同樣也只能產(chǎn)生少量的目標(biāo)蛋白。使用一種溫和的可以轉(zhuǎn)染大多數(shù)細(xì)胞的轉(zhuǎn)染試劑，就可獲得蛋白質(zhì)的高表達(dá)。

現(xiàn)將一些影響蛋白表達(dá)的關(guān)鍵因素分列如下： 細(xì)胞系(有些類型的細(xì)胞比其他細(xì)胞產(chǎn)量高) 質(zhì)粒骨架(例如：增強(qiáng)子，啟動子，轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件) 目的蛋白(有些蛋白很難獲得高表達(dá)量) 目的蛋白的cDNA序列(例如：密碼子的優(yōu)化) 培養(yǎng)條件(營養(yǎng)物，代謝廢物，轉(zhuǎn)染抑制物)  當(dāng)這些因素都得到優(yōu)化，并加入合適配比和數(shù)量的轉(zhuǎn)染復(fù)合物(轉(zhuǎn)染試劑-質(zhì)粒)后，就可獲得至少達(dá)到平均表達(dá)水平的穩(wěn)定表達(dá)克隆。

腫瘤細(xì)胞瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染  制備一種穩(wěn)定細(xì)胞系的*步是選擇一種同時含有選擇性標(biāo)記物和目的基因的載體。選擇性標(biāo)記物通常是可以產(chǎn)生一種蛋白質(zhì)或者酶來幫助細(xì)胞在某些毒性物質(zhì)存在下存活的基因。一旦選好了質(zhì)粒載體，無論瞬時或者穩(wěn)定表達(dá)都采用一樣的轉(zhuǎn)染方法。在加入選擇性試劑之前，被轉(zhuǎn)染的細(xì)胞至少要在標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基中培養(yǎng)過夜。這樣就使細(xì)胞有時間表達(dá)足量的蛋白使之能夠耐受選擇性試劑的作用。細(xì)胞于是在加有選擇性試劑的培養(yǎng)基中生長。那些未成功轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的細(xì)胞即被殺死。而只有那些成功轉(zhuǎn)染的細(xì)胞能夠生長。有的時候，還可以將選擇性試劑持續(xù)加入到培養(yǎng)基中，以維持對細(xì)胞的選擇壓力。 
 胞漿型磷脂酶A2IgG    小鼠促腎上皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)
 胞質(zhì)接頭蛋白Keap1IgG    小鼠促卵泡素(FSH)
 胞質(zhì)緊密粘連蛋白1IgG    小鼠促甲狀腺素釋放激素(TRH)
 苯乙醇胺甲基轉(zhuǎn)移酶IgG    小鼠促甲狀腺素(TSH)
 鼻咽癌細(xì)胞相關(guān)基因6IgG    小鼠促黃體激素(LH)
 臂板蛋白3AIgG    小鼠雌三醇(E3)
 臂板蛋白3FIgG    小鼠雌激素(E)
 臂板蛋白4CIgG    小鼠雌二醇受體(ER)
 標(biāo)記胰島素IgG    小鼠雌二醇(E2)
腫瘤細(xì)胞