腫瘤細胞是科研實驗中常用到的細胞，當人臍靜脈內(nèi)皮細胞達到90%融合時，需要對細胞進行傳代培養(yǎng)。

首先培養(yǎng)瓶的準備：用纖維粘連蛋白（BPF，貨號#8248）包被培養(yǎng)瓶，包被濃度為2ug/cm2，包被時間為4度過夜或37度一小時。

將培養(yǎng)基（ECM，貨號#1001）、胰酶/EDTA消化液（T/S，貨號#0103）、胰酶中和液（TNS，貨號#0113）和無鈣鎂離子的磷酸鹽緩沖液（DPBS，貨號#0303），溫度回復至室溫，我們不推薦用37°C水浴加熱試劑和培養(yǎng)基。

棄去原培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基，用10mlDPBS沖洗人臍靜脈內(nèi)皮細胞，然后加入2ml胰酶消化液。輕輕搖晃培養(yǎng)瓶以至胰酶消化液覆蓋所有人臍靜脈內(nèi)皮細胞。注意：使用ScienCell實驗室的胰酶/EDTA消化液，會把胰酶消化對臍靜脈內(nèi)皮細胞的損害減少到zui低。

將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱中1-2分鐘，在孵化后期，輕輕拍打培養(yǎng)瓶以使臍靜脈內(nèi)皮細胞脫離瓶壁。顯微鏡下觀察臍靜脈內(nèi)皮細胞形態(tài)變化，直至80%臍靜脈內(nèi)皮細胞變圓。然后立即加入10ml胰酶中和液并輕輕搖動培養(yǎng)瓶。

收集人臍靜脈內(nèi)皮細胞并將其轉(zhuǎn)入50ml離心管中。再加入10ml培養(yǎng)基沖洗培養(yǎng)瓶以確保收集所有的殘余臍靜脈內(nèi)皮細胞。在顯微鏡下觀察培養(yǎng)瓶中剩余臍靜脈內(nèi)皮細胞的數(shù)量以確定是否將臍靜脈內(nèi)皮細胞大部分收集，剩余臍靜脈內(nèi)皮細胞數(shù)應小于5%。

以1000轉(zhuǎn)/分（1000rpm)離心收取的臍靜脈內(nèi)皮細胞5分鐘，棄去上清，在新加的培養(yǎng)基中重懸臍靜脈內(nèi)皮細胞。

對腫瘤細胞計數(shù)，然后將它們接種到新的纖維粘連蛋白包被過的培養(yǎng)瓶中，37度培養(yǎng)即可。

 CBP/CREBBP 血小板源性生長因子受體-B抗體

 Cbx8 血小板源性生長因子受體-A抗體

 CC16 血小板源性生長因子-B抗體

 CCK8 血小板源性生長因子-BB抗體

 CCL1/TCA3/I-309 血小板源性生長因子-A抗體

 CCL11/Eotaxin 1 血小板因子4抗體

 CCL12/MCP5 血小板糖蛋白GPIb抗體

 CCL13/MCP-4 血小板內(nèi)皮細胞黏附分子-1抗體

 CCL14/HCC-1 血小板內(nèi)皮細胞黏附分子-1抗體

 CCL15/MIP5 血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa抗體
腫瘤細胞