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技術文章

細胞株污染的清除

閱讀:180          發(fā)布時間:2018-6-5

培養(yǎng)細胞株一經(jīng)污染,多數(shù)較難處理。如果污染細胞價值不大,宜棄之;在尋找原因后*消毒操作室,復蘇或重新購置細胞,再培養(yǎng)。

若污染細胞價值較大,又難于重新得到,可采取以下辦法清除。

一、細菌和真菌的清除

1、使用抗生素

抗生素對殺滅細菌較有效。聯(lián)合用藥比單獨用藥效果好。預防用藥比污染后再用藥效果好。預防用藥一般用雙抗生素,污染后清除用藥需采用大于常用量5~10倍的沖洗法,于加藥后作用24~48小時,再換常規(guī)培養(yǎng)液。此法在污染早期有效。

二、支原體的清除

1、用MRA處理

用MRA(Mycoplasma Removal Agent)處理細胞,每4天換一次液,連續(xù)處理15天以確保細胞純潔健康,效果好.

2、用清洗純化法清除支原體污染的方法

細胞營養(yǎng)馴化→細胞群的篩選→細胞清洗→反復離心洗滌

其原理是利用離心力、細胞、微生物質量和懸液的浮力差達到清除支原體的目的。由于支原體個體小且除發(fā)酵支原體外多為細胞外寄生,所以通過反復洗滌細胞和低速離心換液使其中潛在的支原體數(shù)量降低限。

如結合敏感抗生素的抑殺作用,可達到更好的效果。

3、藥物輔助加溫處理

先用藥物處理后,再將污染的組織培養(yǎng)物放在41℃培養(yǎng)18小時,可殺死支原體,但對細胞有不良影響。

4、細胞株使用支原體特異性血清

用5%的兔支原體免疫血清可去除支原體污染,因特異抗體可抑制支原體生長,故經(jīng)抗血清處理后11天即轉為陰性,并且5個月后仍為陰性。但此法比較麻煩,不如用抗生素方便、經(jīng)濟。

5 x 10^5 cells/vial 人毛囊角質細胞 HHFK

5 x 10^5 cells/vial 人淋巴內皮細胞 HLEC

5 x 10^5 cells/vial 人淋巴成纖維細胞 HLF

5 x 10^5 cells/vial 人扁桃體上皮細胞 HTEpiC

5 x 10^5 cells/vial 人口腔角質細胞 HOK

5 x 10^5 cells/vial 人牙齦成纖維細胞 HGF

5 x 10^5 cells/vial 人牙周膜成纖維細胞 HPLF

5 x 10^5 cells/vial 人食道平滑肌細胞 HESMC

5 x 10^5 cells/vial 人食道上皮細胞 HEEpiC

5 x 10^5 cells/vial 人胃平滑肌細胞 HGSMC
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