Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒使用方法

Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒使用方法:

        1、 取1ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)配置液加入到25mgBSA的蛋白標(biāo)準(zhǔn)管中，*溶解蛋白標(biāo)準(zhǔn)品，即為25mg/ml的蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液。配制成的蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液                可-20℃長期保存。

        2、 取適量25mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液，稀釋至終濃度為0.5mg/ml。標(biāo)準(zhǔn)品與蛋白樣品用同樣的溶液稀釋。但為了簡(jiǎn)便起見，通常使用                0.9%NaCl或PBS稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。

        3、 做標(biāo)準(zhǔn)曲線。將標(biāo)準(zhǔn)品按0，1，2，4，8，12，16，20ul加到96孔板中，不足20ul的加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液補(bǔ)足到20ul。

        4、 將待測(cè)的蛋白樣品稀釋至合適濃度，加到96孔板中，使待測(cè)樣品總體積也為20ul。

        5、 每孔加入考馬斯亮藍(lán)G250溶液200ul，充分混勻（可將酶標(biāo)板放在振蕩器上振蕩30s），室溫放置3-5min后，以標(biāo)準(zhǔn)曲線0號(hào)做參比，在                 595nm波長下比色測(cè)定，記錄各孔吸光度值。以標(biāo)準(zhǔn)品蛋白含量（ug）為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。

        6、 如用分光光度計(jì)測(cè)定，請(qǐng)?jiān)诘谌降臅r(shí)候?qū)?biāo)準(zhǔn)品體積改為1ml，濃度梯度用生理鹽水稀釋為0，1，2，5，10，15，30ug/ml。或根據(jù)樣                品調(diào)整濃度梯度。

        7、 將樣品稀釋至合適濃度，加到小試管中，使待測(cè)樣品總體積也為1ml。

        8、 每只試管加考馬斯亮藍(lán)G250溶液3ml，充分混勻，室溫放置3-5min后，以標(biāo)準(zhǔn)曲線0號(hào)做參比，在 595nm波長下比色測(cè)定，記錄各孔吸光度值。