微載體培養(yǎng)概述

微載體是目前*的zui有發(fā)展前途的一種動物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)，其兼具懸浮培養(yǎng)和貼壁培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)，放大容易。目前微載體培養(yǎng)廣泛用于培養(yǎng)各種類型細(xì)胞，蛋白質(zhì)產(chǎn)品，如293細(xì)胞，成肌細(xì)胞，Ve r o細(xì)胞，CHO細(xì)胞。常用商品化微載體有三種：Cytodex ，Cytopore和Cytoline。 使用較多的反應(yīng)器有兩種：貝朗公司的BIOSTAT B反應(yīng)器，使用雙槳葉無氣泡通氣攪拌系統(tǒng);NBS公司的CelliGen，CelliGen PlusTM和Bioflo3000反應(yīng)器，使用Cell-lift雙篩網(wǎng)攪拌系統(tǒng)。兩種系統(tǒng)都能實現(xiàn)培養(yǎng)細(xì)胞和收獲產(chǎn)物的有效分離。 微載體培養(yǎng)293細(xì)胞，首先要選擇合適的微載體類型和攪拌速度。接種細(xì)胞可用1L spinner微載體培養(yǎng)系統(tǒng)或是其它貼壁培養(yǎng)方式準(zhǔn)備，采用灌流培養(yǎng)，培養(yǎng)周期10-15天，能達(dá)到的細(xì)胞密度為5-10×106/ml。

無血清懸浮培養(yǎng) 無血清懸浮培養(yǎng)是用已知人源或動物來源的蛋白或激素代替動物血清的一種細(xì)胞培養(yǎng)方式，它能減少后期純化工作，提高產(chǎn)品質(zhì)量，正逐漸成為動物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)的研究新方向。要實現(xiàn)293細(xì)胞無血清懸浮培養(yǎng)必須先將貼壁培養(yǎng)293改造為懸浮培養(yǎng)293S細(xì)胞并尋找適合高密度無血清培養(yǎng)的培養(yǎng)液配方。 懸浮培養(yǎng)時，由于缺少血清和蛋白的保護(hù)作用，293S對剪切力的敏感度增加，難以達(dá)到高密度培養(yǎng)，導(dǎo)致293S產(chǎn)生病毒的數(shù)量比貼壁培養(yǎng)低5-10倍左右。細(xì)胞接種后，灌流培養(yǎng)7天，達(dá)到細(xì)胞密度5×106/ml，增殖5-10倍。